[发明专利]薄壳山核桃花粉离体萌发液体培养基及其测定花粉活力的应用

权利要求书

1.薄壳山核桃花粉离体萌发液体培养基，其特征在于：该培养基以蒸馏水为溶剂，内含蔗糖、H₃BO₃和Ca(NO₃)₂·4H₂O。

2.根据权利要求1所述的薄壳山核桃花粉离体萌发液体培养基，其特征在于所述溶质由200g/L的蔗糖、200~300mg/L的H₃BO₃和500mg/L的Ca(NO₃)₂·4H₂O组成。

3.上述任一权利要求所述培养基测定花粉活力的应用，其特征在于，包括以下步骤：

1)花粉采集

选择发育正常、无病虫害的健壮薄壳山核桃植株，在花药变黄时采摘雄花花序，将其摊在硫酸纸上，置于避风干燥处，次日花药即可散粉；筛出花粉，装入密封袋中，冷藏备用；

2)花粉复水处理

在密闭的容器中，用K₂SO₄或CuSO₄·5H₂O饱和盐溶液调节相对湿度RH=97%，将花粉放置于该容器中，进行4~8h的复水处理；

3)花粉离体萌发及花粉管生长

同时配制液体培养基，其组分为：200g·L^-1的蔗糖＋200～300mg·L^-1的H₃BO₃＋500mg·L^-1的Ca(NO₃)₂·4H₂O；在凹槽载玻片上滴加50μL液体培养基，用大头针蘸取已复水处理的花粉使其均匀地撒在培养基上，将载玻片放入铺有湿润脱脂棉的培养皿内，在黑暗、25℃条件下保湿培养；4h后花粉开始萌发，花粉管伸长生长，24h后花粉生长趋于稳定；

4）花粉活力的测定

离体培养24h后，每个玻片随机选取5个不重复的视野，每个视野花粉数不少于50个，以花粉管长度大于花粉粒直径视为萌发，并选取50个测定花粉管长度，各试验均重复3次。