[发明专利]免疫球蛋白级分及其方法

说明书

本申请是申请号为200680016015.0、发明名称为“免疫球蛋白级分及其方法”的申请的分案申请，该母案申请是2006年5月10日提交的PCT申请PCT/AU2006/000607进入中国国家阶段的申请。

技术领域

本发明涉及用作食品添加剂的含有IgA的组合物的制备。更具体地，本发明涉及制备富集IgA的乳制品提取物组合物的方法以及这样的组合物。

背景技术

根据以前在本领域作的工作理解本发明。然而，以下的讨论并非承认或认可任何引用的材料在本申请的优先权日之前在澳大利亚被公开、使用或是作为公知常识的一部分。

免疫球蛋白A(IgA)是在人的分泌物(包括乳汁)中主要的免疫球蛋白，其为机体提供抵抗病原体的保护，其结合到引起疾病的病毒、细菌、真菌及它们的毒素。IgA为婴儿提供抵抗上述病原体的必需保护。当口服时IgA抗体是有效的，这是因为其抵抗肠内酶的降解，因此使得其理想地作为营养品(nutraceuticals)或食品补充剂。IgA可与益生菌联用以抑制或降低由病原体引起的副作用。应用包括将IgA作为营养品成分以靶向病原体，所述病原体引起人粘膜表面例如鼻、眼、耳、肺、乳房部和阴道的感染。此外，含有IgA的产品适于肠和口部健康应用。由于通常存在于牛奶中的IgA水平低，以商业规模提高IgA产量的现有方法是通过免疫方案以提高牛奶中的水平。典型地，牛奶包含比率为约1∶8的IgA和IgG。

目前在全世界以实际上相同的方式使用实质上相同的方法生产用于食品消费的含有IgA的组合物。最常见的生产方法被称为超免疫法，借助此法给大量的牛施用致免疫物质(例如病毒)以产生超免疫应答。作为超免疫应答的结果，由赋予免疫性的牛产生的牛奶含有增加量的IgA，也称为“超免疫奶”。然后使用标准的膜技术浓缩所述超免疫奶以产生含有约5％w/w IgA的乳产品提取物，所述提取物可用作食品补充剂，例如婴儿配方奶。

该生产超免疫奶的方法的固有问题在于，免疫法方案通常需最多达三个月在牛内产生超免疫应答，并且还需一个月收获足够数量的超免疫奶以生产商业数量的含有IgA的乳产品提取物。另外，与本发明的方法相比，此方法还是昂贵的。

由于可变的糖基化，IgA具有在约4.5-6.5范围内的酸性等电点或pl，通常认为其不能以具有商业价值的量吸附到阳离子交换树脂上。本发明的方法令人惊奇地使得可以通过调节装载和洗脱条件，通过阳离子交换色谱从乳产品(例如脱脂乳)中分级IgA。这样的方法以前还未以商业规模实现。

此外，本发明的方法还可包括在纯化乳产品的其它组分(例如乳铁传递蛋白、乳过氧化物酶或生长因子)的现有方法中，作为其一部分。此方法的一个实例是其中乳产品与阳离子交换树脂接触，随着流动相离子强度的增加，通过依次洗脱，首先洗脱富集IgA的级分，随后是贫IgA的乳过氧化物酶级分，然后是乳铁传递蛋白级分。

发明内容

本发明涉及制备富集IgA的乳产品提取物组合物的方法，其不需要超免疫牛并因此避免了与此相关的时间和成本。

因此，本发明的目的在于提供富集IgA的乳产品提取物组合物以及其方法，所述方法可以以商业规模使用，其克服了现有技术中的至少一些缺点。术语“富集IgA的”意为在洗脱的乳产品提取物中IgA∶IgG的比率与在分级之前的乳产品中的IgA∶IgG的比率相比增加。

根据本发明的一个方面，提供了制备富集IgA的乳产品提取物组合物的方法，所述组合物包含从乳产品中提取的IgA和IgG，其中IgA与IgG的相对含量与乳产品中IgA与IgG的相对含量相比升高，所述方法包括：

提供：

乳产品源；

阳离子交换树脂；和

流动相；

使乳产品与阳离子交换树脂接触，使得IgA与IgG相比优先吸附在阳离子交换树脂上；

用流动相洗脱所述阳离子交换树脂；以及

收集洗脱的富集IgA的级分。

对本领域的技术人员而言，显而易见的是：在富集IgA的乳产品提取物组合物的制备中，所述乳产品不必局限于全牛奶，而是其它乳产品也可用作原料。

在本发明的另一方面中，提供一种方法，其中所述乳产品选自全乳、脱脂乳、乳清和初乳。

生产富集IgA的乳产品提取物组合物的特定条件可以变化，并仍产生富集IgA的级分。