[发明专利]一种检测多巴胺的电极的制备方法

说明书

技术领域

本发明属于生化分析领域，涉及一种检测多巴胺的快速电极的制备方法。

背景技术

多巴胺(DA)是存在于中枢神经系统的一类重要的神经传递素, 它能调节脑内相关中枢神经系统的多种功能及精神活动，如感知、情感、行为和运动等。体内DA失调将会导致精神分裂症以及帕金森氏综合症等疾病。因此，对其含量测定在生理功能研究和临床应用方面都具有重要的意义。

近年来，不同类型检测DA的方法和应用成为研究热点。国内外常采用的检测DA的方法包括高效液相色谱法，紫外-可见分光光度法，荧光分光光度法，毛细管电泳法，电化学方法等。但现有的这些检测方法不同程度的存在分析速度慢，检测结果不稳定，操作工艺复杂，成本较高等问题。

事实上，由于抗坏血酸（AA）、多巴胺前躯体及代谢产物的存在，使得DA的检测成为一大难题。传统的检测方法无法排除这些物质的干扰，电化学方法作为一种新兴的检测手段，能够有效的排除AA、尿酸（UA）等物质的干扰，在一定的浓度范围内选择性的检测出DA。目前，科研工作者已经研究出一系列选择性检测DA的电化学方法。如石墨烯修饰玻碳电极，在保持AA浓度始终为1mM的情况下，能够检测出DA浓度的线性范围是4μM-100μM，检测限是2.64μM（Kim, Y.-R., S. Bong, et al. Electrochemical detection of dopamine in the presence of ascorbic acid using graphene modified electrodes. Biosensors and Bioelectronics. 2010.25(10): 2366-2369.）；漆酶/多壁碳纳米管修饰玻碳电极，在生理水平的AA和3,4-二羟基苯乙酸（DOPAC）干扰下，该电极检测DA的线性范围是1-30μM，检测限是0.4μM(Xiang, L., Y. Lin, et al. Laccase-catalyzed oxidation and intramolecular cyclization of dopamine: A new method for selective determination of dopamine with laccase/carbon nanotube-based electrochemical biosensors. Electrochimica Acta. 2007.52(12): 4144-4152)；二茂铁/多壁碳纳米管修饰玻碳电极，在AA浓度高达10mM情况下，检测DA的线性范围是0.5μM-20μM，检测限是0.3μM(Cheng, H., H. Qiu, et al. Investigation of the electrochemical behavior of dopamine at electrodes modified with ferrocene-filled double-walled carbon nanotubes. Electrochimica Acta. 2012. 63: 83-88.)。这些电极均能在特定浓度的干扰物存在下，较灵敏的选择性检测出DA。但这些电化学检测DA方法使用的电极多为玻碳电极，玻碳电极价格相对昂贵且需要经过复杂的预处理活化步骤，使得电极的制备非常复杂。

发明内容

本发明的目的是提供一种检测DA的电极的制备方法。本发明用成本低廉的丝网印刷电极（SPE）为载体，修饰上还原氧化石墨烯(rGO)、β-环糊精(β-CD)和葡萄糖氧化酶(GOx)，得到修饰电极SPE/rGO/β-CD/GOx，实现了快速有效的检测DA的目的。该电极具有成本低、操作简便、快速、灵敏、选择性好等优点。

本发明提供一种检测多巴胺的电极的制备方法，该方法包括如下步骤：

（1）将rGO加入无水乙醇中，超声分散0.5～8h得到rGO悬浮液，所述rGO悬浮液浓度为100～2000mg /L；

（2）移取rGO悬浮液并滴涂至活化处理后的SPE上，滴涂量为10～30μL，制得SPE/rGO；

（3）将β-CD和GOx溶解于pH值为6.2～8.0的PBS缓冲液中，每1mL的PBS缓冲液中溶有0.005～0.025g的β-CD和活力为500～5000U的GOx；再使用SPE/rGO扫描该混合溶液，扫描的电位范围为-0.2～0.8V，得到SPE/rGO/β-CD/GOx电极。

步骤（1）所述rGO悬浮液浓度为1000mg/L。