[发明专利]PSMD4蛋白在制备肝癌预后评估试剂盒中的应用

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及一种PSMD4蛋白的应用，具体地说，涉及PSMD4蛋白在制备肝癌预后评估试剂盒中的应用。

背景技术

肝癌是目前最常见的恶性肿瘤之一，其发病率和死亡率长期居高不下。我国是世界上肝癌发病最多的国家，每年新发病例约占全球50%。统计资料表明，肝癌术后高转移复发率（5年复发率达70％，小肝癌也达50％）已成为进一步提高远期疗效的瓶颈，肝癌预后判断指标匮乏。

肝癌转移是一个多因素参与并相互作用的复杂过程，即关乎癌细胞本身、又与癌细胞同癌周微环境及宿主免疫状态的相互作用有关。目前至少有20余种基因异常表达被确定与肝癌的发生发展有关，但已确定的肝癌相关基因在肝癌中异常表达率并不高，这些指标的敏感性及特异性尚难以满足临床预测要求。

本领域迫切需要寻找能预测肝癌病情及预后的相关基因和/或蛋白，这方面的研究对临床治疗肝癌及预防肿瘤复发具有重要意义。

PSMD4蛋白(蛋白酶体26S非ATP酶亚基4，GeneID:5710)。PSMD4的功能目前仍不十分清楚。有研究显示，PSMD4可能与细胞分化和机体发育有关（参见文献：Smalle,J.,et al.,The pleiotropic role of the26S proteasome subunit RPN10in Arabidopsis growth and development supports a substrate-specific function in abscisic acid signaling.Plant Cell,2003.15(4):p.965-80.；Szlanka,T.,et al.,Deletion of proteasomal subunit S5a/Rpn10/p54causes lethality,multiple mitotic defects and overexpression of proteasomal genes in Drosophila melanogaster.J Cell Sci,2003.116(Pt6):p.1023-33.；Hamazaki,J.,et al.,Rpn10-mediated degradation of ubiquitinated proteins is essential for mouse development.Mol Cell Biol,2007.27(19):p.6629-38）

目前为止，肝癌的发生的分子机制仍不清楚，有效的治疗靶点和诊断标志物也十分有限。

目前尚无文献报道PSMD4与肝癌复发或预后判定相关。

发明内容

本发明的目的在于提供PSMD4蛋白的新应用，特别是在制备肝癌预后评估试剂盒中的应用。

本发明人经过广泛而深入的研究，首次发现，采用免疫组化方法检测PSMD4蛋白在肝癌组织中的相对表达量，能够判断肝癌患者出现复发的风险及术后状况。基于PSMD4蛋白的相对表达量与肝细胞癌的这种相关性，以该蛋白作为分子标记对其表达量进行检测可以用于指导肝癌的预后判断。

本发明提供了PSMD4蛋白在制备肝癌预后评估试剂盒中的应用，该应用是指将PSMD4蛋白作为分子标记，利用PSMD4单克隆抗体或多克隆抗体，

以及免疫组化实验试剂，分析PSMD4蛋白在肝癌组织中的相对表达量。

利用特异性抗PSMD4蛋白的抗体，包括单克隆抗体和多克隆抗体，用于制备确定肝癌手术预后的制剂或试剂盒，这对于本领域技术人员来说是显而易见的。

所述的PSMD4多克隆抗体为商品化抗体，制备方法参见文献Yokoyama,W.M.,Christensen,M.,Santos,G.D.and Miller,D.2006.Production of Monoclonal Antibodies.Current Protocols in Immunology.74:2.5.1–2.5.25。

本发明还提供了使用上述试剂盒用于体外检测PSMD4蛋白在肝癌组织中的表达量的方法，该方法包括以下步骤：

（a）利用本试剂盒中的免疫组化实验试剂（二甲苯，乙醇，3%H₂O₂甲醇液，1%BSA封闭液，DAB显色试剂，苏木素和辣根过氧化物酶）标记羊抗兔IgG将肝癌组织切片进行免疫组化染色；

（b）利用显微镜和成像装置拍摄为数码照片；

（c）利用生物图像处理软件分析肿瘤和瘤旁组织阳性信号强度，给出评分；