[发明专利]用于确定柳枝稷生态型的SRAP特异性分子标记引物及柳枝稷生态型检测方法无效
| 申请号： | 201310002422.8 | 申请日： | 2013-01-05 |
| 公开（公告）号： | CN102994499A | 公开（公告）日： | 2013-03-27 |
| 发明（设计）人： | 黄琳凯;张新全;杨盛婷;张瑜;曾兵;蒋晓梅;季杨 | 申请（专利权）人： | 四川农业大学 |
| 主分类号： | C12N15/11 | 分类号： | C12N15/11;C12Q1/68 |
| 代理公司： | 北京集佳知识产权代理有限公司 11227 | 代理人： | 赵青朵;李玉秋 |
| 地址： | 625014 四*** | 国省代码： | 四川;51 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 用于 确定 柳枝 生态型 srap 特异性 分子 标记 引物 检测 方法 | ||
1.一种SRAP引物组，其特征在于，由具有SEQ ID NO：1所示核苷酸序列的上游引物和具有SEQ ID NO：2所示核苷酸序列的下游引物组成。
2.如权利要求1所述的SRAP引物组在鉴定柳枝稷生态型中的应用。
3.一种柳枝稷生态型检测试剂盒，其特征在于，其包括：Taq酶和用于柳枝稷生态型鉴定的SRAP引物组；
其中，所述用于柳枝稷生态型鉴定的SRAP引物组包括：具有SEQ ID NO：1所示核苷酸序列的上游引物和具有SEQ ID NO：2所示核苷酸序列的下游引物。
4.根据权利要求3所述的柳枝稷生态型检测试剂盒，其特征在于，所述Taq酶为GoTaq酶。
5.一种鉴定柳枝稷生态型的特异性分子标记，其特征在于，具有如SEQ ID NO：3所示的核苷酸序列。
6.一种柳枝稷生态型的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤1：用具有SEQ ID NO：1所示核苷酸序列的上游引物和具有SEQ ID NO：2所示核苷酸序列的下游引物对柳枝稷基因组DNA进行扩增，获得扩增产物；
步骤2：取所述扩增产物电泳，根据所述电泳的结果鉴定所述柳枝稷的生态型；
所述扩增产物的电泳结果中呈现303bp的特异性条带，所述柳枝稷为高地型；
所述扩增产物的电泳结果中不呈现303bp的特异性条带，所述柳枝稷为低地型；
其中，所述303bp的特异性条带的核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，步骤1中所述扩增的程序为：
94℃预变性5min；
94℃变性1min，35℃复性1min，72℃延伸1min，共5个循环；
94℃变性1min，50℃复性1min，72℃延伸1min，共35个循环；
72℃延伸10min。
8.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，步骤1中所述扩增的体系包括：所述柳枝稷基因组DNA、Taq酶、所述具有SEQ ID NO：1所示核苷酸序列的上游引物、所述具有SEQ ID NO：2所示核苷酸序列的下游引物、dNTPs、MgCl2、灭菌水。
9.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述电泳的介质采用琼脂糖凝胶。
10.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述琼脂糖凝胶中的琼脂糖的含量以质量分数计为2%。
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