[发明专利]细胞培养基和方法

说明书

技术领域

本文提供了与新类型的细胞培养基、进料和补充物有关的组合物、方法和用途。所述培养基、进料和补充物具有几种期望的性能，所述性能包括、但不限于：具有超过它们的正常溶解度限度的某些组分、增加的辐射耐受性、延长的释放性能、高溶解度、增加的贮存期限和热稳定性。在某些实施方案中，这样的特征将改善用户工作流和生物反应器生产力。

附图说明

下文描述的且并入本说明书中和构成本说明书的一部分的以下附图解释了示例性实施方案，它们不应当视为限制本公开内容的范围。

图1显示了为制备细胞培养基、进料和/或补充物组分的微米/纳米混悬液而开发的新方法。

图2显示了微米混悬液和液体进料的细胞生长、蛋白生产和递送的性能对比。微米混悬液在试验的条件下的性能与液体进料相当，并表现出比液体进料更高的递送效力。

图3是包囊的微米混悬液珠子的示意图，所述珠子被另外包被以延长释放。

图4显示了PLGA包衣对延迟组分从微囊化的微米混悬液制品内的释放的影响。a)上图：无包衣；b)下图：使用PLGA A和PLGA B的包衣的对比。A和B具有不同的丙交酯:乙交酯比率。具有85:15比率的PLGA B表现出良好的延长释放性能，并维持它的形状，具有在溶液中释放组分>15天的能力。

图5显示了辐照对本公开内容的制品的影响。用以下物质培养的细胞中的蛋白生产效率的对比：i)辐照的微米混悬液；ii)干燥的、包囊的微米混悬液，其与iii)中的那些类似；iii)未辐照的对照液体进料，其通过过滤来灭菌。

图6表明，当在辐照的试验进料中培养细胞时，大约30kGy的辐照不会负面地影响(a)细胞生长(上图)；或者，(b)蛋白生产(下图)。还试验了另外的补充物68和86，并且表现出类似的结果(数据未显示)。

图7表明，γ辐照对微米混悬液和对干燥的、包囊的微米混悬液存在可忽略的影响。该图显示了与未辐照的液体对照相比，在微胶囊(“珠子”)中或作为微米混悬液(MS)，30kGy的γ如何影响包囊的化合物(参见最右侧)。NG＝没有γ辐照,和G＝γ-辐照。

图8显示了包含不稳定组分的微囊化珠子的示意图，所述不稳定组分被包埋和/或包裹在抗氧化剂中以通过减少在辐照过程中产生的氧化物质的影响来保护不稳定的分子。

图9显示了反应性物质的螯合作用以及痕量元素中的金属离子与氨基酸的示例性配位络合物的形成。

图10显示了制备微米混悬液和包囊的微米混悬液的方法的示意图。

图11显示了辐照的、微囊化的珠子向生物反应器中的直接添加的2种选择。左图显示了在可高压灭菌的多孔金属过滤器内添加的珠子；或者，右图表明，可以将珠子直接加入培养物中。

图12：在以下情况下，使用多孔金属过滤器装置引入培养物中的补充物的延长释放的对比：(a)具有PLGA包衣的微米混悬液珠子：上图，和(b)没有珠子，仅AGT进料。

发明概述

在本公开内容中描述的培养基、进料和补充物组合物具有几种期望的性能，所述性能包括、但不限于：(i)以“超浓缩”水平递送某些组分的能力，所述“超浓缩”水平远远超过它们在培养系统中的正常溶解度限度，(ii)即使在辐射灭菌以后，增加的维持培养基/进料功能性的能力，(iii)增加的延长释放内部组分的能力，(iv)高溶解度且快速的溶解，(v)干燥形式下的较长的贮存期限，(vi)增加的热稳定性，(vii)多达8个log的减小的病毒污染风险，(viii)与其它灭菌技术(诸如UV、过滤和/或HTST巴氏消毒)相组合的能力，(ix)应用于多种培养基形式(诸如AGT、DPM、APM)以及具有较高浓度的不稳定组分的制剂的能力，(x)应用于多种产品类型(诸如培养基、进料、补充物、功能性添加剂等)的能力。由于这些特征，所述组合物可以直接加入生物反应器中或加入已经在进行中的培养物中，并由此可以改善用户工作流和生物反应器生产力。

因此，在本公开内容中描述的组合物、方法和用途部分地涉及包含微米混悬液的细胞培养基、浓缩进料、功能性添加剂、补充物；还可以涉及包含一种或多种包囊的微米和/或纳米混悬液的新细胞培养基、进料和/或补充物组合物；还可以涉及使用辐射将以上组合物灭菌，使得所述培养基/进料的功能性即使在暴露于辐射以后也得到维持。本公开内容也提供了制备这样的培养基的方法，包括此类培养基的特征及其用途。贯穿本公开内容，有时可能仅提及细胞培养基，但是它在适用的情况下也包括进料和/或补充物。