[发明专利]有关胚胎移植延迟和使用外周血单核细胞的体外受精方法

权利要求书

1.一种用于雌性患者的体外受精方法，所述方法包括以下步骤：

(a)将有效量的包含外周血单核细胞的组合物引入到子宫中，以及

(b)在起始所述患者的所述体外受精后的预定延迟之后移植至少一个胚胎到所述患者的所述子宫中；并且

其中当与缺少这些步骤的体外受精方法相比较时，所述方法使得成功起始妊娠的所述子宫中所述胚胎植入的可能性增加。

2.如权利要求1所述的方法，其中所述预定延迟是足以降低所述患者的自身免疫反应危险的量的时间。

3.根据权利要1所述的方法，其中在胚胎移植前的所述预定延迟至少是所述患者的两个月经周期或两个排卵周期。

4.如权利要求1所述的方法，其中所述外周血单核细胞是从所述患者的血液中获得。

5.如权利要求1所述的方法，其中所述胚胎是在胚胎移植培养基内移植到所述子宫中并且所述胚胎移植培养基包含起始促进剂。

6.如权利要求5所述的方法，其中所述患者是人，所述起始促进剂是可溶性人白细胞抗原G(sHLA-G)并且所述胚胎移植培养基中所述sHLA-G的浓度在0.175OD到0.350OD的范围内，其中OD指的是在400nm到450nm范围内的波长下测量到的光学密度。

7.如权利要求6所述的方法，其进一步包括临胚胎移植到所述子宫之前，将所述胚胎在所述胚胎移植培养基中培养5分钟到20分钟范围内的时期。

8.一种用于雌性患者的体外受精方法，所述方法包括以下步骤：

(a)在所述患者中起始排卵以获得至少一个卵母细胞，

(b)从所述患者获得外周血单核细胞(PBMC)，

(c)在步骤(a)之后的预定延迟之后，将所述患者的PBMC引入到所述患者的子宫中，以及

(d)在步骤(c)之后，将所述胚胎引入所述雌性患者的所述子宫中以实现所述胚胎在所述子宫中的植入。

9.如权利要求8所述的方法，其中所述患者是人，所述胚胎是通过使在步骤(a)中从所述患者获得的卵母细胞受精而获得的；步骤(c)的所述预定延迟等于所述患者的至少两个月经周期或两个排卵周期；并且在步骤(d)中，在步骤(c)之后20小时到24小时，将所述胚胎引入到所述患者的所述子宫中。

10.一种用于雌性患者的体外受精方法，所述方法包括以下步骤：

(a)起始体外受精，

(b)从所述患者的血液中获得第一部分外周血单核细胞(PBMC)，

(c)在合适的培养基中，培养所述第一部分PBMC，

(d)从所述患者的血液中获得第二部分新鲜的PBMC，

(e)将所述第一部分培养的PBMC与所述第二部分新鲜的PBMC组合，

(f)在胚胎移植前，将所述组合的PBMC引入到所述患者的所述子宫中，以及

(g)将至少一个胚胎移植到所述患者的所述子宫中以实现妊娠。

11.如权利要求11所述的方法，其中步骤(c)的所述合适的培养基包含具有L-谷氨酰胺、碳酸氢钠、人重组白蛋白和人绒毛膜促性腺激素(hCG)的RPMI1640培养基；并且其中所述hCG的浓度是每一毫升所述培养基不少于5IU。

12.一种用于雌性患者的体外受精方法，所述方法包括以下步骤：

(a)从所述患者中获得至少一个卵母细胞，

(b)用精子使所述卵母细胞受精以形成受精卵并且使所述受精卵在体外发育到胚胎期，

(c)冷冻保存所述胚胎，

(d)从所述患者的血液中提取第一部分外周血单核细胞(PBMC)，

(e)在合适的培养基中，培养所述第一部分PBMC，

(f)等待足够降低所述患者的自身免疫反应危险的预定时期，

(g)在步骤(f)的所述等待期的最后一天，从所述患者的血液中提取第二部分新鲜的PBMC，

(h)将所述培养的第一部分PBMC与所述新鲜的第二部分PBMC组合以获得包含新鲜的和培养的PBMC的组合物，

(i)将所述PBMC组合物引入到所述患者的所述子宫中，

(j)将所述胚胎从冷冻保存状态解冻，以及

(k)将至少一个解冻的胚胎移植到所述患者的所述子宫中以实现妊娠。