[发明专利]具有脂肪酶变体的洗涤剂组合物

说明书

序列表的引用

本申请含有一个呈计算机可读形式的序列表，它通过引用结合在此。

发明背景

发明领域

本发明涉及洗涤剂组合物和获得其的方法。

相关技术说明

持续研发洗涤剂组合物以优化并改进其清洁效率。它们基于不同成分的一种复杂混合物，在这些成分之中涵盖表面活性剂和酶。然而，脂肪酶在阴离子表面活性剂的存在下通常不稳定，从而影响组合物的稳定性。因此将希望获得包含阴离子表面活性剂以及脂肪酶两者的具有改进的稳定性的洗涤剂组合物。

WO92/05249涉及具有改进的性质的疏绵状嗜热丝孢菌(Thermomyces lanuginosus)的脂肪酶变体。尽管该文献描述到变体可以在氨基酸位置D254处包括一个取代，但未显示也未表明这一具体位置对于获得可以用于提供包含阴离子表面活性剂的稳定化的洗涤剂组合物的一种稳定变体来说是重要的。

发明概述

本发明涉及一种获得洗涤剂组合物的方法，包括引入(a)一种母体脂肪酶的一种脂肪酶变体，该变体与SEQ ID NO:2具有至少60％序列一致性、在对应于SEQ ID NO:2的成熟多肽的D254的一个位置处具有一个取代并且具有脂肪酶活性；和(b)一种阴离子表面活性剂，其中所述组合物与包含该母体脂肪酶的一种相对应的组合物相比具有增加的稳定性。

定义

脂肪酶：术语“脂肪酶”或“脂解酶”或“脂质酯酶”是如酶命名法所定义的EC3.1,1类中的一种酶。它可以具有脂肪酶活性(三酰基甘油脂肪酶，EC3.1.1.3)、角质酶活性(EC3.1.1.74)、固醇酯酶活性(EC3.1.1.13)和/或蜡酯水解酶活性(EC3.1.1.50)。出于本发明的目的，根据实例中所述的程序测定脂肪酶活性。在一个方面，本发明的变体具有SEQ ID NO:2的成熟多肽的脂肪酶活性的至少20％、例如至少25％、至少30％、至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少100％。

等位基因变体：术语“等位基因变体”意指占用同一染色体位点的一种基因的两个或更多个替代形式中的任一者。等位基因变异通过突变天然地出现，并且可以在群体内产生多态现象。基因突变可以沉默的(在所编码的多肽中无变化)或可以编码具有改变的氨基酸序列的多肽。一种多肽的一种等位基因变体是由一种基因的一种等位基因变体编码的一种多肽。

cDNA：术语“cDNA”意指一种DNA分子，该分子可以通过由获自一种真核或原核细胞的一种成熟拼接的mRNA分子反转录而制备。cDNA缺乏内含子序列，这些序列可能存在于相对应的基因组DNA中。初始初级RNA转录物是mRNA的一种前体，该前体通过一系列步骤(包括拼接)进行加工，随后呈现为成熟拼接的mRNA。

编码序列：术语“编码序列”意指一种多核苷酸，该多核苷酸直接规定了一种变体的氨基酸序列。编码序列的边界一般由一个开放阅读框架决定，该开放阅读框架从一个起始密码子(如ATG、GTG或TTG)开始并且以一个终止密码子(如TAA、TAG或TGA)结束。编码序列可以是一种基因组DNA、cDNA、合成DNA或其组合。

控制序列：术语“控制序列”意指为编码本发明的一种变体的一种多核苷酸的表达所需的核酸序列。每个控制序列对于编码变体的多核苷酸可以是天然的(即来自同一基因)或外来的(即来自一种不同基因)或对于彼此是天然的或外来的。这样的控制序列包括(但不限于)一个前导区、聚腺苷酸化序列、前肽序列、启动子、信号肽序列以及转录终止子。控制序列至少包括一个启动子以及转录和翻译终止信号。控制序列可以具备连接子用于引入促进控制序列与编码一种变体的多核苷酸的编码区的连接的特异性限制位点的目的。

表达：术语“表达”包括涉及一种变体的制造的任何步骤，包括(但不限于)转录、转录后修饰、翻译、翻译后修饰以及分泌。

表达载体：术语“表达载体”意指一种直链或环状DNA分子，该分子包括编码一种变体的一种多核苷酸并且可操作地连接于提供用于其表达的控制序列。

片段：术语“片段”意指在一种成熟多肽的氨基和/或羧基末端不存在一个或多个(例如若干个)氨基酸的一种多肽；其中该片段具有脂肪酶活性。在一个方面，一个片段含有成熟多肽的氨基酸数目的至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％以及至少95％。