[发明专利]检测过敏原的系统和方法

说明书

技术领域

本发明一股来说涉及使用质谱对试样(例如食物试样)中的过敏原进行检测和定量的试剂盒和方法。

背景技术

食物过敏可诱发有害免疫反应，例如，如皮炎、哮喘、胃肠损伤、过敏性休克等。用于对食物试样中的过敏原进行检测和/或定量的常规方法一股采用免疫分析，其可具有许多缺点。例如，一种称作酶联免疫吸附分析(ELISA)的此类方法需要使用昂贵的试剂盒并且最多进行半定量。另外，常规免疫分析在每次筛选中一股限于单一过敏原并且因缺乏特异性而频繁地造成假阳性。

因此，所属领域内需要对食物试样中的过敏原进行检测和定量的改进的试剂盒和方法。

发明内容

根据各实施例，本文提供使用质谱对试样中的过敏原进行检测和/或定量的方法和试剂盒。如下文所述，这些方法和试剂盒可使得能够通过利用所关注过敏原所特有的一种或一种以上氨基酸序列来对试样中的至少一种过敏原(例如，卵白蛋白、溶菌酶、酪蛋白、乳球蛋白、高和低分子量麦谷蛋白、小麦、黑麦、燕麦、大麦、芥子、芝麻和各种坚果，包括澳大利亚坚果、阿月浑子坚果、巴西坚果、核桃、花生和榛子)进行检测和/或定量。例如，可使用液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)来检测过敏原特有的胰蛋白酶肽。在许多实施例中，可观察每一肽中的所选多反应监测(MRM)转换以使得能够对例如食物试样中的过敏原进行可靠定量。

根据各实施例，揭示各种过敏原所特有的一组肽。例如，可使用所述过敏原所特有的经分离肽来对过敏原卵白蛋白、溶菌酶、酪蛋白(同种型S1和S2)、乳球蛋白、含有高和低分子量麦谷蛋白的谷蛋白、小麦、黑麦、燕麦、大麦、芥子、芝麻和各种坚果中的每一者进行检测和/或定量。在一些情况下，这些过敏原术语为广泛定义，其涵盖来自不同蛋白质的各种类型的肽且在一些情况下涵盖不同属和/或种的过敏原。例如，术语芥子涵盖从芸苔属(Brassica)和芥属(Sinapis)两者中的种获得的过敏原，这两个属均应理解为芥子的形式。举例来说，在鸡卵中发现的过敏原卵白蛋白所特有的经分离肽可具有氨基酸序列SEQ ID NO：1-7中的一者或一者以上。也在鸡卵中发现的过敏原溶菌酶所特有的经分离肽可具有氨基酸序列SEQ ID NO：8-11中的一者或一者以上。牛乳蛋白质酪蛋白S1所特有的经分离肽可具有氨基酸序列SEQ.ID NO.12-18中的一者或一者以上。牛乳蛋白质酪蛋白另一同种型酪蛋白S2所特有的经分离肽可具有氨基酸序列SEQ.ID NO.24-29中的一者或一者以上。大麦蛋白质所特有的经分离肽可具有氨基酸序列SEQ.ID NO.30-33中的一者或一者以上。低分子量麦谷蛋白所特有的经分离肽可具有氨基酸序列SEQ.ID NO.34-59中的一者或一者以上。高分子量麦谷蛋白所特有的经分离肽可具有氨基酸序列SEQ.ID NO.60-79中的一者或一者以上。归类为芥子的各物种的蛋白质所特有的经分离肽可具有氨基酸序列SEQ.ID NO.80-112中的一者或一者以上。燕麦蛋白质所特有的经分离肽可具有氨基酸序列SEQ.ID NO.113-116中的一者或一者以上。黑麦蛋白质所特有的经分离肽可具有氨基酸序列SEQ.ID NO.117-123中的一者或一者以上。芝麻蛋白质所特有的经分离肽可具有氨基酸序列SEQ.ID NO.124-132中的一者或一者以上。小麦蛋白质所特有的经分离肽可具有氨基酸序列SEQ.ID NO.133-138中的一者或一者以上。巴西坚果蛋白质所特有的经分离肽可具有氨基酸序列SEQ.ID NO.139-155中的一者或一者以上。榛子蛋白质所特有的经分离肽可具有氨基酸序列SEQ.ID NO.156-172中的一者或一者以上。澳大利亚坚果蛋白质所特有的经分离肽可具有氨基酸序列SEQ.ID NO.173-181中的一者或一者以上。花生蛋白质所特有的经分离肽可具有氨基酸序列SEQ.ID NO.182-187中的一者或一者以上。阿月浑子坚果蛋白质所特有的经分离肽可具有氨基酸序列SEQ.ID NO.188-203中的一者或一者以上并且最后核桃蛋白质所特有的经分离肽可具有氨基酸序列SEQ.ID NO204-212中的一者或一者以上。

上述肽中的每一者可使用与每一过敏原特有肽相关的特定MRM转换来检测和/或定量。根据各实施例，每一肽的优化MRM转换在下文论述于表1-19中。