[发明专利]犬源化肿瘤坏死因子抗体及其使用方法

权利要求书

1.犬源化抗体或其抗原结合片段，其特异性结合犬肿瘤坏死因子。

2.如权利要求1所述的犬源化抗体或其抗原结合片段，其中通过以下方法制备所述抗体，所述方法包括下列步骤：

提供来自犬之外的物种的供体抗体，其中所述供体抗体对肿瘤坏死因子具有结合特异性；

将所述供体抗体框架区氨基酸序列的每一氨基酸残基与存在于一个或多个犬抗体框架区氨基酸序列中对应位置的每一氨基酸残基进行比较，以鉴别出所述供体抗体框架区的氨基酸序列内与所述一个或多个犬抗体框架区的氨基酸序列内对应位置的一个或多个氨基酸残基不同的一个或多个氨基酸残基；以及

用所述一个或多个犬抗体中对应位置存在的一个或多个氨基酸残基取代所述供体抗体中的一个或多个鉴别出的氨基酸残基。

3.如权利要求2所述的抗体或其抗原结合片段，其中取代所述一个或多个鉴别出的氨基酸残基的步骤包括：用所述对应位置存在的与一个或多个被取代的氨基酸残基具有最高同源性的一个或多个氨基酸残基取代所述一个或多个鉴别出的氨基酸残基。

4.如权利要求2或3所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述方法进一步包括下述步骤：用犬抗体的重链和/或轻链恒定结构域取代所述供体抗体的重链和/或轻链恒定结构域。

5.如权利要求1-4中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含轻链可变区和/或重链可变区，所述轻链可变区包含氨基酸序列SEQ ID NO:1或者与所述氨基酸序列具有至少85％同一性的氨基酸序列，所述重链可变区包含氨基酸序列SEQ ID NO:2或者与所述氨基酸序列具有至少85％同一性的氨基酸序列。

6.如权利要求5所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体包含轻链和/或重链，所述轻链包含氨基酸序列SEQ ID NO:3或者与所述氨基酸序列具有至少85％同一性的氨基酸序列，所述重链包含选自SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6和SEQ ID NO:7的氨基酸序列，或与所述氨基酸序列具有至少85％序列同一性的氨基酸序列。

7.如权利要求1-5中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体包含重链，所述重链包含选自SEQ ID NO:4、非糖基化SEQ ID NO:4、非糖基化SEQ ID NO:5、非糖基化SEQ ID NO:6、非糖基化SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:7的氨基酸序列，或与所述氨基酸序列具有至少85％序列同一性的氨基酸序列。

8.如权利要求1-5中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体包含重链，所述重链包含选自SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6的氨基酸序列，或与所述氨基酸序列具有至少85％序列同一性的氨基酸序列。

9.如权利要求1-4中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含轻链可变区和/或重链可变区，其中所述轻链可变区包含以下中的至少一个：

由氨基酸序列SEQ ID NO:10组成或包含所述氨基酸序列的FR1框架区；

由氨基酸序列SEQ ID NO:11组成或包含所述氨基酸序列的FR2框架区；

由氨基酸序列SEQ ID NO:12组成或包含所述氨基酸序列的FR3框架区；以及

由氨基酸序列SEQ ID NO:13组成或包含所述氨基酸序列的FR4框架区；

所述重链可变区包含以下中的至少一个：

由氨基酸序列SEQ ID NO:14组成或包含所述氨基酸序列的FR1框架区；

由氨基酸序列SEQ ID NO:15组成或包含所述氨基酸序列的FR2框架区；

由氨基酸序列SEQ ID NO:16组成或包含所述氨基酸序列的FR3框架区；以及

由氨基酸序列SEQ ID NO:17组成或包含所述氨基酸序列的FR4框架区。

10.如权利要求9所述的抗体或其抗原结合片段，其包含具有SEQ ID NO:10的FR1区的轻链可变结构域，所述FR1区已通过选自以下的一个或多个氨基酸取代得以修饰：位置5(T5)的氨基酸残基T被氨基酸残基M或I取代，S7是T，Α9是L或P，S12是Α，L13是V，S14是T或R，Q15是P或R，E16是D，K18是E、Α、P、T或L，V19是Α，T20是S，T22是S或Y，以及C23是Y。