[发明专利]根据乳胶凝集法检测基质金属蛋白酶-3的方法

说明书

技术领域

本发明是涉及特定的活体物质的检测方法的发明，更具体而言是涉及根据乳胶凝集法检测基质金属蛋白酶-3的方法的发明。

背景技术

基质金属蛋白酶（MMP）-3是软骨细胞或滑膜细胞中产生的蛋白质分解酶，在关节滑膜增殖时增加，有蛋白聚糖、纤连蛋白、胶原、层粘连蛋白等的细胞外基质的分解作用。从而，血中的MMP-3浓度反映类风湿性关节炎中确认的关节破坏，从而可作为关节炎活动性的指标而有用。在现在市售的MMP-3测定用试剂中，有使用酶联免疫测定法（ELISA法）的试剂、和使用乳胶凝集法（LTIA法）的试剂。

另外，作为关于MMP-3的检测法的现有专利关联文献，可举出国际公开单行本（WO2010/090079）（专利文献1）、特开平4-237499号公报（专利文献2）、特开平11-318449号公报（专利文献3）。另外，作为非专利文献，可举出PRESKY,DH.,et al.,Biochemical and Biophysical Research Communications,1993,vol.193,No.1,pp.364-370（非专利文献1）。

现有技术文献

专利文献

专利文献1:国际公开WO2010/090079单行本

专利文献2:特开平4-237499号公报

专利文献3:特开平11-318449号公报

专利文献4:特开昭63-65369号公报

专利文献5:特开昭53-24015号公报

非专利文献

非专利文献1：PRESKY,DH.,et al.,Biochemical and Biophysical Research Communications,1993,vol.193,No.1,pp.364-370

非专利文献2：“单克隆抗体实验操作入门”（讲谈社Scientific、安藤民卫、千叶丈著）、1993年8月20日发行

发明内容

发明要解决的技术问题

已经这样进行着血中MMP-3的检测，但在上述的已有的测定试剂中还存在着实用上的问题。即，使用ELISA法的试剂在待测样品处理能力（迅速性）方面有问题，使用乳胶凝集法（LTIA法）的试剂虽确认了迅速性，但已知存在在低值区域与ELISA法的测定值不符的现象。

本发明在基于乳胶凝集法测定血中MMP-3时，发现了不发生低值区域的测定值不对应的单克隆抗体，以提供由使用该抗体的乳胶凝集法的血中MMP-3的检测手段作为课题。

可解决上述的课题的单克隆抗体，一般认为在低值区域反应性高，并且，是从确认不到与MMP-10等其他MMP家族的交叉反应性的针对MMP-3的单克隆抗体中确认得到，但建立具体性的预测是困难的。

解决问题的技术方案

本发明人为解决上述的问题，通过将负载单克隆抗体14B1的乳胶粒子、和负载单克隆抗体3D3的乳胶粒子与血液待测样品接触，将因与血液待测样品中的基质金属蛋白酶-3的抗原抗体反应而产生的凝集作为信号，发现了定量检测所述血液待测样品中的人基质金属蛋白酶-3的、根据乳胶凝集法的检测方法（以下，也称为本发明的检测方法）可解决上述的问题。

上述的2种单克隆抗体基于常规方法、例如，非专利文献2的“单克隆抗体实验操作入门”制造。

另外，在本发明的检测方法中使用的乳胶凝集法（LTIA法），典型地可基于上述的专利文献4、5的公开进行。

即，通过使分别地包被上述的2种单克隆抗体的乳胶粒子与血液待测样品共存，进行所述待测样品中的由人MMP-3和这些的乳胶粒子上的单克隆抗体的结合的，检测所述乳胶粒子的凝集的LTIA法，可定量所述待测样品中的人MMP-3。

第2，本发明提供用于进行上述的检测方法的检测试剂和检测试剂盒。在所述检测试剂及检测试剂盒中含有至少“负载单克隆抗体14B1的乳胶粒子、和负载单克隆抗体3D3的乳胶粒子”。另外，根据需要也可能含有稀释液、清洗液等。

如后面所述的，产生这2种单克隆抗体的杂交瘤各自保藏在独立行政法人产业技术综合研究所专利生物保藏中心，单克隆抗体3D3保藏为“小鼠-小鼠杂交瘤3D3（保藏号：FERMP-22223）”，单克隆抗体14B1保藏为“小鼠-小鼠杂交瘤14B1（保藏号：FERMP-22225）”。

本发明中，“血液待测样品”是指血清、血浆、全血等的待测样品，特别适宜是血清待测样品或血浆待测样品，再适宜是血清待测样品。