[发明专利]大豆事件pDAB9582.814.19.1检测方法

说明书

对相关申请的交叉引用 

本申请要求2011年7月26日提交的临时申请No.61/511,658的优先权，其通过全文提述并入本文。 

发明背景 

编码Cry1F和Cry1Ac synpro(Cry1Ac)的基因能够向转基因植物赋予昆虫抗性，例如对鳞翅类昆虫的抗性；而编码PAT(膦丝菌素乙酰转移酶)的基因能够向转基因植物赋予对除草剂膦丝菌素(草铵膦(glufosinate))的耐受性。已在大豆中成功表达PAT用作产生昆虫抗性转基因作物中的选择性标志物，以及向转基因作物赋予对除草剂草铵膦的商业水平的耐受性。 

已知外来基因在植物中的表达受到其在植物基因组中位置的影响，可能是由于整合位点附近的染色质结构(例如异染色质)或转录调控元件(例如增强子)的接近度(Weising等,Ann.Rev.Genet22:421-477,1988)。同时，转基因在基因组中不同位置处的存在会以不同方式影响植物的总体表型。为此，经常需要筛选大量事件以鉴定出一个事件，其特征为导入的感兴趣基因的最佳表达。例如，已在植物和其他生物中观察到在事件中导入基因的表达水平可能有很大变化。还可能在表达的空间或时间模式中有差异，例如转基因在多种植物组织中的相对表达差异，其可能不对应于从存在于导入的基因构建体的转录调控元件所预期的模式。为此，普遍产生数百到数千种不同事件，并从那些事件中筛选出具有期望的转基因表达水平和模式的单一事件以用于商业目的。具有期望的转基因表达水平或模式的事件可用于通过使用常规育种方法的有性异型杂交将该转基因基因渗入到其他遗传背景中。这类杂交的后代维持原始转化体的转基因表达特征。该策略用于确保在良好适应于当地生长条件的许多品种中有可靠的基因表达。 

期望能检测特定事件的存在以确定有性杂交的后代是否含有感兴趣的转基因或转基因组。另外，用于检测特定事件的方法将有助于遵循要求例如源自重组作物植物的食物的上市前批准和标记的监管，或用于环境监测，监 测田野中作物的性状，或监测源自作物收获的产品，以及用于确保监管或合约条款(regulatory or contractual term)下的多方的依从性。 

可以通过本领域中已知的任何核酸检测方法来检测转基因事件的存在，所述方法包括但不限于聚合酶链式反应(PCR)或使用核酸探针的DNA杂交。这些检测方法一般着眼于频繁使用的遗传元件如启动子、终止子、标志基因等，因为对许多DNA构建体而言，编码区是可交换的。因此，这类方法对于在不同事件之间，特别是使用相同DNA构建体或非常相似的构建体产生的事件之间区分可能无用，除非临近于插入的异源DNA的侧翼DNA的DNA序列是已知的。例如，一种事件特异性的PCR测定法记载于美国专利申请2006/0070139，其针对玉米事件DAS-59122-7。期望存在简单和有识别力的方法用于鉴定大豆事件pDAB9582.814.19.1。 

发明概述 

本发明涉及一种用于检测新的昆虫抗性和除草剂耐受性的转基因大豆转化事件，称为大豆事件pDAB9582.814.19.1的方法。作为本公开的一部分，包含大豆事件9582.814.19.1的大豆品系的至少2500个种子保藏于美国典型培养物保藏中心(ATCC)，10801University Boulevard，Manassas，VA，20110。该保藏物，ATCC专利保藏名PTA-12006，在2011年7月21日由ATCC接受。该保藏依照并遵循布达佩斯条约关于用于专利程序的种子保藏的条款进行并维持。 

含有该事件的大豆植物的DNA包含本文中描述的接合(junction)/侧翼序列，其表征插入的DNA在大豆基因组中的位置。SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2对大豆事件pDAB9582.814.19.1具诊断性。更具体地，SEQ ID NO:1的bp1400/1401和bp1536/1537处以及SEQ ID NO:2的bp152/153处的接合周围的序列对大豆事件pDAB9582.814.19.1具诊断性。下文段[0009]描述了包含这些接合的序列的例子，所述接合是含有大豆事件pDAB9582.814.19.1的大豆DNA特征性的。 

本发明提供一种在包含大豆DNA的样品中检测大豆事件pDAB9582.814.19.1的方法，所述方法包括：