[发明专利]用于抑制乙型肝炎病毒的基因表达的组合物和方法

说明书

背景技术

本发明涉及双链核糖核酸(dsRNA)，以及它们在介导RNA干扰以抑制对于乙肝病毒基因的复制和致病必要的基因表达中的应用，尤其在病毒聚合酶、表面抗原、e-抗原和X蛋白的抑制中。另外，所述双链核糖核酸治疗或预防乙型肝炎病毒感染导致的慢性肝病/疾病、炎症、纤维化病症和增殖性疾病如癌症的应用也是本发明的一部分。

乙型肝炎病毒是严格亲肝的含双链DNA的病毒。虽然DNA是遗传物质，其复制循环涉及反转录步骤以从前基因组RNA复制为DNA。为了完成这个必要的步骤，病毒编码的聚合酶具有反转录活性。乙型肝炎病毒被分类为肝脱氧核糖核酸病毒(Hepadnaviruses)的一个成员并且属于肝脱氧核糖核酸病毒科。成人初次感染乙型肝炎病毒引起具有器官炎症、发热、黄疸和血液中肝转氨酶升高的症状的急性肝炎。约95％的急性肝炎不需要治疗就能痊愈。这些不能克服病毒感染的病人在多年内经受慢性疾病过程，具有增加的发展成肝硬化或肝癌的风险。乙型肝炎病毒感染的母亲向新生婴儿的母婴传播也引起慢性肝炎。慢性乙型肝炎病毒感染的治疗选择是有限的并且仅仅在一些情况下导致完全和持续地缓解。在共同感染了丙型肝炎、丁型肝炎或人免疫缺陷病毒的乙型肝炎病毒的患者中出现另外的临床和治疗并发症。

乙型肝炎病毒通过血液或血液制品、精液、阴道分泌物或唾液传播。药物滥用和性交是危险的活动并且促进病毒的传播。破损的粘液型的上皮细胞与污染的体液的接触可能足以感染。孵育时间为40-200天。感染的风险与传播的乙型肝炎病毒颗粒成比例。婴儿经常由他们的乙型肝炎病毒携带的母亲母婴感染，在地方性区域是主要的健康问题。

大约20亿人被感染乙型肝炎病毒并且4亿人是慢性携带者。高度流行的地区是非洲和东南亚，当地累计有20-80％的感染的人。

基于序列同源性，乙型肝炎病毒被分类为A-H的基因型，A-D基因型是最重要的基因型。基因型A在北欧-西欧、美国、南美洲和中美洲常见。基因型B和C主要在中国、日本、印度尼西亚和其他东亚国家中。基因型D在南欧、北非和南非发现。不同基因型之间的疾病进程和对于药物治疗的反应不同。

感染性乙型肝炎病毒颗粒具有约42nm的直径。外膜双层含有大、中和小型的表面蛋白。用于病毒表面蛋白结合和内化的关联的肝细胞受体未知。很多拷贝的核心蛋白形成在病毒颗粒内的球形核衣壳结构。每个核衣壳携带作为遗传物质的部分双链DNA和病毒聚合酶。

在被肝细胞摄入之后，核衣壳被转移至核并且释放DNA。此时，DNA链合成完成并且修复缺得到环状共价闭合(circular covalently closed)(ccc)的3.2kb的超螺旋DNA。cccDNA作为四个主要病毒mRNA转录的模板，其为3.5、2.4、2.1和0.7kb长。所有的mRNA是5′-加帽并且在3′-末端多腺苷酸化。在所有四个mRNA的3′-末端存在重叠序列。

3.5kb mRNA作为用于核心蛋白和生产聚合酶的模板。此外，相同的转录物作为前基因组复制中间体并且允许病毒聚合酶引发反转录为DNA。需要核心蛋白用于核衣壳形成。另外，顺序加工活动(sequential processing activity)将一些核心蛋白转化为可分泌的e-抗原。在血液中富含e-抗原与乙型肝炎病毒在肝脏中的复制相关并且作为监测疾病过程的重要诊断标记。

2.4和2.1kb mRNA携带用于表达病毒大、中和小型表面抗原的开放阅读框pre-S1、pre-S2和S2。s-抗原与感染性、完整颗粒相关。另外，感染的患者的血液也含有单独来自s-抗原，不含基因组DNA或聚合酶的非感染性颗粒。这些颗粒的功能还未完全知晓。完全和持续的在血液中检测不到s-抗原被认为是乙型肝炎病毒清除，由此成功治愈的可靠指标。

0.7kb mRNA编码X蛋白。这个基因产物对于病毒基因的有效转录很重要并且也作为宿主细胞基因表达的反式激活蛋白。后者的活性似乎对于在肝癌发展中肝细胞转化很重要。