[发明专利]核酸扩增装置和核酸分析装置

说明书

技术领域

本发明涉及搭载有多个能够单独控制温度的温度控制模块的核酸扩增装置、和在装置的一部分使用该核酸扩增装置的核酸分析装置。

背景技术

温度控制模块需要将其温度绝对值正确地控制在目标温度。以往，在温度控制模块的温度绝对值的测定中，采用下述方法：使用校正完的温度测定探头，在测定温度与目标温度不同的情况下，以使测定温度与目标温度一致的方式进行修正。一般而言，使用校正完的温度测定探头的温度校正的极限精度为±0.25℃。

然而，存在多个能够单独控制温度的温度控制模块搭载于1个装置的情况。此时如果也使用校正完的温度测定探头单独修正各温度控制模块的温度，则修正结束后，各温度控制模块的温度控制精度为±0.25℃。因此，理论上温度控制模块间的温度差最大为0.5℃。

此外，还提出了在温度控制模块的温度校正中使用利用了热变色性液晶的试验片的方法（参照例如专利文献1。）。该方法的原理是，将热变色性液晶混入与流体试样接触的试验片，通过检测将试验片控制于试验温度时液晶的变色，对试验片的温度进行校正。

现有技术文献

专利文献

专利文献1:日本特开平10-206411号公报

专利文献2:日本特开2010-51265号公报

专利文献3:日本特开平05-317030号公报

专利文献4:日本特开2010-166823号公报

专利文献5:日本特表2003-525621号公报

专利文献6:日本特表2005-519642号公报

专利文献7:日本特开2008-278896号公报

专利文献8:日本特开平03-131761号公报

非专利文献

非专利文献1:JOURNAL OF CLINICAL MICROBIOLOGY（临床微生物学杂志）,Feb.2009,p.435-440

发明内容

发明所要解决的课题

因而，在通过温度控制模块进行温度管理的反应中，需要特别精密的温度控制。例如伴随聚合酶链反应（PCR：Polymerase Chain Reaction）、高分辨率熔解（HRM：High Resolution Melting）分析的反应。

PCR法为下述核酸扩增方法：通过交替重复进行n次(1)95℃的热变性温度、(2)约55℃～65℃左右的退火温度、(3)延伸反应温度（以下称为“温度循环”。），使作为目标的核酸序列扩增2n倍。

退火温度和延伸反应温度根据目标序列的不同而不同，该温度要求的精度一般为±0.5℃以内。不过，温度的精确性和再现性越高，则DNA的扩增效率和扩增再现性越高。

该扩增效率和扩增再现性是影响实时PCR（Real time PCR）法的定量精度的重要因素。其中，实时PCR法是通过使用荧光染料来实时测定由PCR带来的扩增，从而由其扩增率（循环次数）对反应液中的核酸量进行定量的方法。

以往，在利用实时PCR法进行的DNA的定量中，使用在用1个温度控制模块进行温度管理的空间内配置有多个反应容器（孔）方式的实时PCR装置。在这样的多个反应容器（孔）用1个温度控制模块进行温度管理的情况下，可以将多个反应容器（孔）间的温度差抑制至±0.2℃以下。

近年来，提出了具有多个温度控制模块的实时PCR装置。该实时PCR装置能够单独对多个温度控制模块进行温度控制，可以同时实行多个温度循环。当然，在这种装置中，多个反应容器（孔）之间要求与仅使用1个温度控制模块时同等水平的温度控制精度。

另一方面，HRM解析是下述分析方法：使通过实时PCR法扩增的扩增产物的温度在约60℃至95℃的范围内，以0.1℃以下的分辨率进行荧光测定，从而确定扩增产物的熔解温度（扩增的双链核酸的两条链结合熔解的温度）。

已知该熔解温度根据扩增序列的不同而不同，理论上，即使是1个碱基的差异也会不同。通过该分析法，可以从混有多个不同序列的扩增反应液对各个序列的核酸进行分离并检测。

另外，对于对设置于多个反应容器（孔）的样品组的熔解温度之差进行比较的目的而言，反应容器（孔）间的温度再现性越高越好，该分析法要求的反应孔间的温度再现性为±0.1℃以下。