[发明专利]防止细胞转化和癌症转移的组合物和方法

说明书

相关申请的交叉引用

本申请要求2011年2月17日提交的申请号为61/443,978的美国临时专利申请的优先权，其公开的内容通过引用并入本文。

发明领域

本发明一般地涉及癌症的诊断和治疗，更具体地涉及基于从癌细胞上脱落的微泡的新型癌症标记物和疗法。

发明背景

肿瘤进展涉及癌细胞在其微环境中彼此间以及与邻近的正常细胞之间相互沟通的能力。来源于人体癌细胞的微泡（MV）已受到关注，因为其明显能够参与信号蛋白在癌细胞之间的水平转移，并且促进癌细胞的侵袭活性。不同类型的高级或侵袭形式的人癌细胞释放MV至其周围环境，这已越来越多的被认为是一种肿瘤生物学的特征。然而，对这些结构是如何产生的及其在癌症进展中的重要性目前仍知之甚少。因此，探索MV在癌症中迄今为止尚未被确认的作用，并利用这些作用开发涉及诊断方法和治疗干涉的组合物和方法具有持续和尚未满足的需求。本发明满足了这些需求。

发明简述

本发明部分地基于我们的发现，即在微泡（MV）介导的正常细胞转化中，从癌细胞脱落的（MV）必需包含组织谷氨酰胺转移酶（tTG）。在这方面，我们发现从多种类型的人癌细胞上脱落的MV都能够赋予正常细胞（以成纤维细胞和上皮细胞为代表的非癌细胞）转化的表型，通过类似存活能力的增强和锚定非依赖性生长，能够证明这种转化表型。我们还发现tTG本身不足以转化正常细胞。相反，tTG必需和一种与其相结合和交联的蛋白（纤连蛋白（FN））一起参与到正常细胞的转化过程中。因而，本发明的一个方面是鉴定具有诱导细胞转化能力的MV，所述转化依赖于tTG的存在。在另一个方面，本发明提供了通过调节与微泡相结合的tTG的作用来抑制诱导正常细胞转化的方法。

在一个实施方式中，本发明提供了一种表征微泡的方法。所述方法包括获取含有微泡的样品和检测微泡中的tTG。基于对MV的检测确定MV是否含有tTG和/或交联的FN，如果在样品中存在与微泡相结合的tTG则将所述MV鉴定为tTG阳性，相反，如果在样品中不存在与微泡相结合的tTG则将所述微泡鉴定为tTG阴性。在另一个实施方式中，所述方法包括检测tTG阳性微泡的存在情况。所述方法包括获取样品和对所述样品进行分析以检测与tTG结合的微泡的存在情况。在另一个实施方式中，所述方法包括获取含有微泡的样品，并对所述微泡进行检测以确定其是否包含交联的FN。如果样品中存在与微泡相结合的交联FN则将所述MV鉴定为交联FN阳性，相反如果样品中不存在与微泡相结合的交联FN则将所述微泡鉴定为交联FN阴性。

所述方法适于分析含有MV的任意样品。在一个实施方式中，所述样品包括来自诊断为患有癌症、疑似患有癌症、或存在癌症风险的个体的液体生物样品。在一个实施方式中，所述样品来自正在接受癌症治疗的个体。

本发明的一个方面包括将个体诊断为具有循环微泡的方法，所述循环微泡为tTG和/或交联的FN阳性或者tTG和/或交联的FN阴性。所述方法包括检测来自个体的样品中的与微泡相结合的tTG和/或交联的FN，如果分别存在tTG和/或交联的FN，则将所述个体鉴定为具有与tTG和/或交联的FN相结合的循环微泡，如果均不存在与微泡相结合的tTG和/或交联的FN，则将所述个体鉴定为不具有与tTG和/或交联的FN相结合的循环微泡。

在不同实施方式中，检测所述微泡包括采用任意适合的技术从液体生物样品中分离微泡。在一个实施方式中，分离所述MV包括使用结合配体捕获。可以使用能够选择性结合tTG或FN，或者选择性结合包括tTG和FN的复合物的任意试剂。在某些实施方式中，所述结合配体选自FN、抗-FN抗体或其抗体结合片段或衍生物、重组tTG和经修饰的tTG、tTG或经修饰的tTG的片段、抗-tTG抗体或其抗体结合片段或衍生物、以及上述试剂的组合。可以使用任意适合的技术和试剂检测是否存在tTG。在不同实施方式中，可以使用上述结合配体中的一种或组合进行检测，其中所述结合配体已被检测标记和/或附着于基质上。

在另一个方面，本发明包括从样品中分离膜结构的方法。该实施方式包括提供可能含有所述膜结构的样品并将所述样品与tTG或其衍生物混合，如果样品中存在所述膜结构，则允许其形成膜结构与tTG或其衍生物的复合物。如果存在所述膜结构，将所述tTG和膜结构的复合物与样品的其余部分分离。