[发明专利]源自卵翅锯角萤的荧光素酶

权利要求书

1.一种荧光素酶，所述荧光素酶源自卵翅锯角萤(Lucidina accensa)。

2.如权利要求1所述的荧光素酶，所述荧光素酶包含：

选自由下述氨基酸序列组成的组的氨基酸序列：SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列，SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列，SEQ ID NO:34所示的氨基酸序列，SEQ ID NO:36所示的氨基酸序列，以及与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:34或SEQ ID NO:36的序列同源性为90%以上的氨基酸序列。

3.如权利要求1或2所述的荧光素酶，所述荧光素酶所催化的荧光素反应的发光强度是在具有SEQ ID NO:31所示的氨基酸序列的荧光素酶催化所述反应时的荧光素发光强度的5.5倍以上。

4.如权利要求1～3中任一项所述的荧光素酶，所述荧光素酶所催化的荧光素反应的发光强度是在具有SEQ ID NO:33所示的氨基酸序列的荧光素酶催化所述反应时的荧光素发光强度的4倍以上。

5.如权利要求1～4中任一项所述的荧光素酶，所述荧光素酶的抗蛋白降解稳定性高于具有SEQ ID NO:30或SEQ ID NO:31所示的氨基酸序列的荧光素酶的抗蛋白降解稳定性。

6.如权利要求1～5中任一项所述的荧光素酶，所述荧光素酶满足下述条件中的至少一条：

与SEQ ID NO:30所示的氨基酸序列的第13位丙氨酸对应的氨基酸残基是脯氨酸，

与SEQ ID NO:30所示的氨基酸序列的第211位苏氨酸对应的氨基酸残基是天冬酰胺，

与SEQ ID NO:30所示的氨基酸序列的第227位苯丙氨酸对应的氨基酸残基是酪氨酸，

与SEQ ID NO:30所示的氨基酸序列的第249位赖氨酸对应的氨基酸残基是甲硫氨酸，

与SEQ ID NO:30所示的氨基酸序列的第530位亮氨酸对应的氨基酸残基是异亮氨酸或精氨酸，和

与SEQ ID NO:30所示的氨基酸序列的第542位丙氨酸对应的氨基酸残基是缬氨酸。

7.如权利要求6所述的荧光素酶，所述荧光素酶同时满足下述条件：

与SEQ ID NO:30所示的氨基酸序列的第50位天冬酰胺对应的氨基酸残基是天冬氨酸，和

与SEQ ID NO:30所示的氨基酸序列的第530位亮氨酸对应的氨基酸残基是精氨酸。

8.如权利要求1所述的荧光素酶，所述荧光素酶在pH7.0～8.0范围内的任何pH条件下都显示出最大发光波长为611nm～615nm的光发射。

9.如权利要求1所述的荧光素酶，所述荧光素酶在pH6.8～7.0范围内的任何pH条件下都显示出最大发光波长为568nm～572nm的光发射。

10.如权利要求1、8或9所述的荧光素酶，所述荧光素酶在55℃以上催化荧光素反应时的发光强度高于在具有SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列的荧光素酶在相同温度下催化所述反应时荧光素的发光强度。

11.一种核酸，所述核酸包含编码权利要求1～10中任一项所述的荧光素酶的碱基序列。

12.如权利要求11所述的核酸，其中，针对在哺乳动物细胞中的表达对编码所述荧光素酶的基因的密码子进行了优化。

13.如权利要求11或12所述的核酸，所述核酸包含由SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:37、SEQ ID NO:38或SEQ ID NO:39表示的碱基序列。