[发明专利]牦牛细管冻精制作方法

说明书

技术领域

本发明涉及牦牛的冻精制作方法，特别是涉及牦牛细管冻精的制作方法。

技术背景

牦牛是生活在我国高海拔、高寒牧区的高原偶蹄目牛科特有物种，耐高寒、高海拔缺氧气候。牦牛的生存能力极强，但生产性能较低，周期长，繁殖技术落后，种公畜利用年限短，加之牦牛性情粗野，活畜引种困难，一直阻碍着牦牛生产的发展。近三十年来人工授精技术已成为家畜繁殖和品种保护的一门先进技术，但是牦牛人工授精技术的关键节点之一牦牛精液的冷冻保存至今仍是一个难题。成年牦种公牛的射精量、精液密度、精子活力、耐冻性都与黄牛、奶牛的有较大区别，难以使用这些牛类的现有方法。如能开发出合适高效的细管冻精制作方法，将会极大地促进牦牛产业的发展。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种牦牛细管冻精制作方法。

本发明解决上述技术问题的技术方案为提供一种牦牛细管冻精制作方法。该方法包括以下步骤：

a、配制稀释液；

b、采精和检查：采取种公牛的精液，并对精液进行常规检查，合格者用于制作细管冻精；

c、稀释：在25～30℃条件下，在待冷冻的精液中加入稀释液并搅拌；

d、灌装：灌装进冻精细管后，放到冷冻架上，控制温度在0～5℃，持续1～2小时进行平衡；

e、冷冻的细管冻精：先使冷冻柜启动后至4℃，停留5分钟；待温度恒定在4℃后将冻精细管移入冷冻箱；从4℃降至-10℃后停留时间为5分钟，此为精液移入冷冻箱后的过渡平衡期；然后冷冻箱从-10℃至-100℃后设定冷冻时间为40分钟；从-100℃至-140℃后设定冷冻时间为20分钟；细管结束冷冻进入液氮中保存备用，其液氮中的温度在-140℃至-193℃；

f、镜检：冷冻结束后，抽检精液活率，解冻抽检活率达到0.6以上移入液氮贮藏罐中冷冻贮藏备用。

其中，上述方法中的牦牛细管冻精制作方法，其特征在于：所述步骤C的稀释方法为，镜检合格的原精，在25-30℃条件按照1∶1的比例加入25-30℃的A液进行稀释，稀释液沿盛原精容器壁缓慢加入，轻轻搅拌；

检测精液浓度，再按每细管中的目标精子数和吸管容积，计算出需添加的B液量，并加入盛原精容器，稀释好后用于后继的灌装细管步骤；

所述稀释液A液的配方为：每100mL蒸馏水+2.97g柠檬酸钠，然后再每100毫升中加入10mL卵黄得稀释液A液；

所述稀释液B液的配方为：每41.75mL A液+7mL甘油+2.5g果糖。

其中，上述方法中所述稀释液中加入青毒素至1000单位/毫升，加入链毒素至1000微克/毫升。

其中，上述方法步骤b要求采集的精液直观检测合格无异状，在35-38℃条件下镜检精子活力达0.7以上者，以及每毫升精液精子数达8亿以上者和畸形率为15％以下才可用于后继步骤。

其中，上述方法步骤C的稀释步骤一般要求按每细管容纳2000万个左右的精子数的要求进行稀释。检测精子浓度一般常用分光光度法。

本发明的有益效果是：在本领域采用本发明制作出来的牦牛细管冻精，在原精液质量满足要求的情况下，解冻后活率能达0.6以上，远好于颗粒冻精等方法，好于现有的其他技术。用此精液进行人工授精配怀率高，能有效提高牦牛质量，克服活畜引种在生态方面的不适应和饲养管理方面的困难，也为本领域提供了一种新的选择，这对牦牛的资源利用来说具有尤其重要的意义。

具体实施方式

以下通过具体实施方式的描述对本发明进行详细的说明。

结合上面的检测方法，本发明方法包括以下步骤：

a、配制稀释液。

b、采精和检查：按常规方法采取种公牛的精液，并对精液进行常规检查，要求直观检查无异状，在35-38℃条件下镜检精子活力达0.7以上者，以及每毫升精液精子数达8亿以上者和畸形率为15％以下者方可用于制作细管冻精。

c、稀释：在25～30℃条件下，在待冷冻的精液中加入稀释液并搅拌。

d、灌装：灌装进冻精细管后，即放到冷冻架上，控制温度在0～5℃，持续1～2小时进行平衡。(平衡温度优选4℃)

e、冷冻：先使冷冻柜启动后至4℃，停留5分钟；待温度恒定在4℃后将细管精液移入冷冻箱；从4℃降至-10℃后停留时间为5分钟，此为精液移入冷冻箱后的过渡平衡期；然后冷冻箱从-10℃至-100℃后设定冷冻时间为40分钟；-100℃至-140℃后设定冷冻时间为20分钟；细管结束冷冻进入液氮中保存备用，其液氮中的温度在-140℃至-193℃。