[发明专利]牦牛细管冻精制作方法

权利要求书

1.牦牛细管冻精制作方法，其特征在于：其制作步骤包括：

a、配制稀释液；

b、采精和检查：采取种公牛的精液，并对精液进行常规检查，合格者用于制作细管冻精；

c、稀释：在25～30℃条件下，在待冷冻的精液中加入稀释液并搅拌；

d、灌装：将精液灌装进冻精细管后，放到冷冻架上，控制温度在0～5℃，持续1～2小时进行平衡；

e、冷冻的细管冻精：先使冷冻柜启动后至4℃，停留5分钟；待温度恒定在4℃后将冻精细管移入冷冻箱；从4℃降至-10℃后停留时间为5分钟，此为精液移入冷冻箱后的过渡平衡期；然后冷冻箱从-10℃至-100℃后设定冷冻时间为40分钟；从-100℃至-140℃后设定冷冻时间为20分钟；细管结束冷冻进入液氮中保存备用，其液氮中的温度在-140℃至-193℃；

f、镜检：冷冻结束后，抽检精液活率，解冻抽检活率达到0.6以上移入液氮贮藏罐中冷冻贮藏备用。

2.根据权利要求1所述牦牛细管冻精制作方法，其特征在于：所述步骤C的稀释方法为，镜检合格的原精，在25～30℃条件按照1∶1的比例加入25～30℃的A液进行稀释，稀释液沿盛原精容器壁缓慢加入，轻轻搅拌；

检测精液浓度，再按每细管中的目标精子数和吸管容积，计算出需添加的B液量，并加入盛原精容器，稀释好后用于后继的灌装细管步骤；

所述稀释液A液的配方为：每100mL蒸馏水+2.97g柠檬酸钠，然后再每100毫升中加入10mL卵黄得稀释液A液；

所述稀释液B液的配方为：每41.75mLA液+7mL甘油+2.5g果糖。

3.根据权利要求2所述牦牛细管冻精制作方法，其特征在于：所述稀释液中加入青毒素至1000单位/毫升，加入链毒素至1000微克/毫升。

4.根据权利要求3所述牦牛细管冻精制作方法，其特征在于：其中，上述方法步骤b要求采集的精液直观检测合格无异状，在35-38℃条件下镜检精子活力达0.7以上者，以及每毫升精液精子数达8亿以上者和畸形率为15％以下才可用于细管冻精。