[发明专利]RANKL-TNF样区鼠源性单克隆抗体及其制备方法与应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物制剂领域，具体地，涉及RANKL-TNF样区鼠源性单克隆抗体及其制备方法与应用。

背景技术

类风湿关节炎（Rheumatoid arthritis，RA）是一种慢性全身性自身免疫性疾病。RA有两个主要的病理学特征，表现为慢性的滑膜炎症以及继发的关节软骨与骨的破坏，最终导致患者关节畸形而致残。2006年国家统计局进行的第二次残疾人调查中发现，类风湿关节炎的致残率占疾病所致肢体残疾的79.4%，造成劳动力丧失，严重影响国民健康水平和国家经济发展，因此研究新型制剂治疗RA具有重要的意义。

慢性进展性的系统性炎症伴随着RA的发生和发展。关节腔与滑膜组织浸润的炎性细胞及其分泌的炎性细胞因子导致了炎症的发生。肿瘤坏死因子α（Tumor necrosis factor，TNF-α）是居于炎性瀑布最上游的炎性细胞因子之一，是一个早期且重要的介导下游炎症正反馈过程的启动因子，可以调节RA慢性炎症的发生和发展。RA中TNF-α主要由活化的巨噬细胞和T细胞所分泌，巨噬细胞的数量、TNF-α的水平与RA病人的关节疼痛指数密切相关。TNF-α从以下几方面参与RA的病理损伤：TNF-α可以刺激滑膜巨噬细胞、纤维母细胞产生IL-1、IL-8等促炎细胞因子，它们与TNF-α协同作用，导致炎症发生与组织损伤；TNF-α可诱导内皮细胞表达分泌粘附因子与趋化因子，促使白细胞等炎性细胞向炎症部位渗透；TNF-α可活化自身的环氧酶/环氧化酵素（Cyclooxygenase,COX），促进前列腺素E₂（Prostaglandin E₂,PGE₂）与血管扩张素和组织胺的分泌，共同作用加剧血管翳的生成。

RA的骨破坏包括关节软骨与软骨下骨的侵蚀与破坏。破骨细胞（Osteoclast,OC）的异常增殖与活化所介导的骨代谢失衡是导致RA关节骨破坏的关键。核因子κB活化受体配基（Receptor activator necrosis factor κB ligand，RANKL）是影响破骨细胞分化与成熟的关键因子。RANKL是TNFSF的成员，有跨膜三聚体与可溶单体两种类型，主要分布在免疫系统、骨骼系统和循环系统中。由活化的T细胞、成纤维样滑膜细胞、巨噬细胞、成骨/基质细胞分泌的RANKL与骨髓基质细胞、破骨前体细胞膜表面的RANKL受体RANK（Receptor activator NF-κB）相结合。RANK胞内区与肿瘤坏死因子受体相关因子6（TNF receptor-associated factor6,TRAF6）结合可活化下游的转录因子NF-κB，继而可启动核因子活化的T细胞c1(Nuclear factor ofactivated T cell c1,NFATc1)，从而可促使破骨细胞分化的相关基因表达，促进了破骨前体细胞增殖分化为成熟的破骨细胞。在体外实验中，应用RANKL与巨噬细胞集落刺激因子（Macrophage colony stimulating factor,M-C SF）共同刺激，可以促使骨髓基质细胞分化为成熟的破骨细胞。TNF-α也同时参与到骨损失的过程，TNF-α与成骨/基质细胞膜表面受体结合后可以促进RANKL的表达，同时TNF-α与破骨细胞及其前体细胞膜表面受体TNFR1或TNFR2相结合后，启动下游NF-κB、JNK、p38、ERK和AKt信号，调节破骨细胞的生成与功能。