[发明专利]一种猪肺炎支原体的培养方法

权利要求书

1.一种猪肺炎支原体的培养方法，其特征在于培养步骤如下：

（1）种子液的制备：

①一级种子繁殖及鉴定

启封冷冻菌种，用培养基将其融化复原，然后以10%（v/v）的量接种于含有4ml/L酚红的PPLO培养基中，37℃培养15-96h，纯度检验合格后作为一级种子备用；

②二级种子繁殖及鉴定

取一级种子按接种量10%（v/v）接种于含有4ml/L酚红的PPLO培养基中，37±2℃培养15-96h，纯度检验合格后作为二级种子备用；

③种子罐制备

取二级种子按接种量10%（v/v）接种于含有4ml/L酚红的PPLO培养基中，温度控制37±2℃，通气培养15-96h，纯度检验合格后备用；

（2）菌液制备

以合格的种子液按5%-20%（V/V）的量接种到含有4ml/L酚红的PPLO培养基，pH值8.0±0.5，温度控制37±2℃，通气培养，并每12h加入1mol/L NaOH将PPLO培养基pH调至8.0，纯度检验和活菌计数，至所需支原体浓度的量。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述的含有4ml/L酚红的PPLO培养基的组分为：

灭活猪血清：200ml/L

酵母浸出液：10ml/L

青霉素：20万单位

葡萄糖：4g/L

酚红：4ml/L

1mol/L NaOH用于调节pH至8.0。