[发明专利]一种乳酸杆菌和芽孢杆菌混合培养的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种乳酸杆菌和芽孢杆菌混合培养方法，尤其涉及一种植物乳杆菌或干酪乳杆菌和枯草芽孢杆菌条件优化的混合培养方法，属于生物技术领域。

背景技术

微生态制剂是指被添加到饲料中的一种重要肠道菌群调节剂，又称益生菌剂，具有调整肠道菌群平衡、促进机体免疫、改善饲料适口性、提高饲料利用率、增强动物抗病能力等作用，作为饲料添加抗生素的替代品已得到养殖业的认可。1989年美国食品药物管理局（FAD）和美国饲料公协会（AAFCO）公布了44种可直接饲喂且通常认为是安全的微生物作为微生态制剂生产菌株，其中包括28种乳酸菌、2种芽孢菌、2种酵母菌和2种曲霉。2008年12月我国农业部1126号公告规定的可直接饲喂动物的饲料级微生物添加剂共16种，如地衣芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、双歧杆菌、粪肠球菌、屎肠球菌、乳酸肠球菌、嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌、植物乳杆菌、乳酸乳杆菌、德氏乳杆菌、乳酸片球菌、戊糖片球菌、沼泽红假单胞菌、酿酒酵母、产魭假丝酵母。

微生态制剂通常由多种微生物组成，是一种混合活菌制剂。目前应用于畜禽养殖业的微生态制剂主要是乳酸菌和芽孢杆菌。乳酸菌为兼性厌氧菌、芽孢杆菌为好氧菌，并且两者的生长特性及营养要求差异很大，传统的工业发酵中通常采用单独培养、然后再混合的生产工艺，由此导致设备利用率低，生产成本增加。研究表明，饲喂芽孢菌的动物，其肠道及粪便中乳酸菌数量增加，说明芽孢菌对乳酸菌的生长有促进作用；目前有报道，有些乳杆菌在有氧条件下生物量提高，在有血红素等物质存在下，可激活其过氧化氢酶，降低氧胁迫，菌体存活性延长。枯草芽孢杆菌为好氧菌，能产生多种过氧化物酶，对氧胁迫有完善的防御机制。基于此理论，研发植物乳杆菌或干酪乳杆菌与枯草芽孢杆菌混合培养的优化工艺条件，为微生态制剂的混合菌群发酵提供参考具有重要意义。

发明内容

针对现有生产工艺的不足，本发明的目的在于提供一种植物乳杆菌或干酪乳杆菌与枯草芽孢杆菌条件优化的混合培养方法。

本发明所述乳酸杆菌和芽孢杆菌混合培养的方法，步骤是：

（1）取指数生长后期至稳定期后期的植物乳杆菌或干酪乳杆菌菌株分别接种到MRS培养基中，37±1℃静止培养12±2小时；

（2）取指数生长后期至稳定期后期的枯草芽孢杆菌菌株接种到LB培养基中，37±1℃、220rpm震荡培养12±2小时；

（3）将步骤（1）制得的植物乳杆菌与步骤（2）制得的枯草芽孢杆按重量比1%﹕10%的混合接种比例接种在MRS-Ca培养基中，37±1℃、220rpm震荡培养18±1小时收获；或将步骤（1）制得的干酪乳杆菌与步骤（2）制得的枯草芽孢杆按重量比1.5%﹕10%的混合接种比例接种在MRS-Ca培养基中，37±1℃、220rpm震荡培养24±1小时收获。

上述乳酸杆菌和芽孢杆菌混合培养的方法中：所述植物乳杆菌优选植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）CGMCC No.6888；所述干酪乳杆菌优选干酪乳杆菌（Lb.casei）ATCC393(pL251)；所述枯草芽孢杆菌优选B.subtilis ATCC23857。

上述乳酸杆菌和芽孢杆菌混合培养的方法中，所述MRS培养基的配方如下：

121℃条件下灭菌15分钟。

上述乳酸杆菌和芽孢杆菌混合培养的方法中，所述LB培养基的配方是：蛋白胨1g，酵母提取物0.5g，NaCl1g，琼脂1.5-2g，水100ml。

上述乳酸杆菌和芽孢杆菌混合培养的方法中，所述MRS-Ca培养基的配方是：在MRS培养基上，加入终重量百分比浓度为0.02%的CaCl₂。

一种应用于上述乳酸杆菌和芽孢杆菌混合培养的方法的植物乳杆菌，所述菌株命名为植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）K2，分离自新疆传统发酵酸奶，申请人已于2012年11月27日保藏于“中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心”，其保藏号为CGMCC No.6888。

本发明公开了一种乳酸杆菌和芽孢杆菌混合培养的方法，特别适合于微生态制剂的液体发酵生产。本发明显著的优点是：将乳酸杆菌和芽孢杆菌进行混合发酵，充分发挥菌株间的协同作用，对乳酸菌的有氧代谢提供保护，提高了设备利用率。

附图说明