[发明专利]利用时间分辨上转换发光技术的侧向流动免疫测定法

说明书

技术领域

本发明属于检测技术领域，具体涉及一种利用时间分辨上转换发光检测技术进行侧向流免疫层析测定的方法及其装置，更具体的涉及一种用于检测分析物在样品中是否存在及其含量的测定方法。

背景技术

基于膜的侧向流动免疫测定(lateral flow immunoassays，LFA)已被商品化而用于对大量分析物的测定。基于侧向流动免疫测定技术平台的医疗诊断产品的实例包括妊娠测试和药物滥用测试。目前，这些测试由于其成本低和使用方便而主要用于即时检测(point of care，POC)和非处方(over the counter，OTC)测试市场。大多数使用该平台的现有商品可提供定性和半定量结果。最近，已开发出一些能够提供定量测量的侧向流层析测定技术。这些技术使用一些与侧向流层析测定格式相结合的检测技术。已报道的检测技术包括吸光率或反射率；传统的荧光、磷光、时间分辨荧光和磷光、磁场、表面增强拉曼光谱、以及上转换荧光。这些不同检测技术的关键是使用了不同类型的可被测量的探针。例如，使用诸如金颗粒和染色胶乳颗粒的有色颗粒来进行吸光率或反射率测量。可使用诸如封装有荧光染料的量子点和胶乳颗粒的荧光颗粒作为探针来进行荧光测量。已报道可使用具有长发射寿命的磷光颗粒来进行侧向流动免疫测定，以通过使用时间分辨发光测量来量化分析物。半导体纳米颗粒通常作为探针而用于对侧向层析分析物的表面增强拉曼测量中。磁性颗粒也已作为探针而与侧向流动免疫测定相结合，用于通过测量颗粒磁场而量化分析物。虽然所有这些检测技术都具有其各自的优点，但就检测性能和成本而言均不完美。例如，基于吸光率或反射率的LFA技术可相对简单且制造成本低。它们均具有灵敏度低的明显缺点。此外，基于颜色的检测技术不能检测基于血液的样品，而需在测量前进行样品处理，以除去红细胞。传统的基于荧光的侧向流层析测定已显示出高的灵敏度。然而，该技术由于需要诸如带通滤波片和反射镜的昂贵的光学元件而显得相当复杂而又昂贵。基于表面拉曼的侧向流层析测定系统也相当复杂而又昂贵。基于表面拉曼的侧向流层析测定系统已报道具有良好的检测灵敏度，且还由于低背景干扰而可提供更好的特异性。基于磁场的LFA技术具有良好的灵敏度和特异性。然而，侧向层析装置的检测区域和校准区域对于检测器必须是透明的。这很不方便，且由于试剂和装置未与用户完全隔开而易于受到污染。时间分辨荧光侧向层析最近也已报道具有良好的灵敏度和特异性。该系统据报道比诸如传统的荧光和表面增强拉曼的其它侧向层析检测系统成本低。然而，只有有限数量的现有探针适用于该检测平台。这些探针通常需要紫外线或近紫外线激发源，而这些激发源通常可能干扰诸如血样的分析物和样品基质。

更近以来，已开发出整合到侧向流层析测定装置内的上转换磷光体颗粒，用于对分析物的高灵敏度检测。该检测平台的优点包括由于样品基质的最小背景干扰而具有潜在的高检测灵敏度、以及近红外激发更深地穿入到组织和其它样品基质内。该平台的一个最大缺点是难以获得高度均匀且表面官能化的非转换磷光体纳米颗粒。该平台的另一缺点是需要使用强大的激发红外激光和昂贵的滤光器，用于将可见荧光与强的红外激光激发分离开。该组合使得使用透射模式来进行荧光测量不切实际，而使用透射模式进行荧光测量是优选的测量模式，与反射测量模式相比可简化读数装置和降低成本。因此，目前需要一种用于量化分析物的简单、便宜、使用方便而又灵敏度高的基于膜的测定系统。本发明因此而来。

发明内容

本发明目的在于提供一种用于检测分析物在样品中是否存在及其含量的测定方法，解决了现有技术中激发光在近紫外线区域中被分析物本身和液态样品基质吸收而导致显著降低了结果的准确性等问题。

为了解决现有技术中的这些问题，本发明提供的技术方案是：

一种用于检测分析物的侧向流层析测定装置，包括：

(1)叠置在固相支持垫上的多孔滤膜，所述多孔滤膜设置有检测区域；所述检测区域固定有第一特异性结合部；

(2)结合物释放垫，与所述多孔滤膜流体连通，且沉积有结合物探针；其中所述结合物探针具有由第二特异性结合部改性的上转换发光探针。

优选的，沿所述液体流动方向还设置有而与所述检测区域物理性分离的校准区域，所述校准区域固定有第三特异性结合部。

优选的，还包括吸收垫，用于收集流经所述检测区域和校准区域的液体。

优选的，所述结合物释放垫包括可释放的校准结合物探针，该校准结合物探针具有由第四特异性结合部改性的上转换发光探针。

优选的，所述支持垫对于可见光大体上是透明的，且透射率超过70％。