[发明专利]一种评价硫酸盐还原菌抑制效果的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种利用硫酸盐还原菌细菌测试瓶或自行配制的适合硫酸盐还原菌生长的培养基（内加指示剂），快速评价杀菌剂或抑制剂对该微生物的杀灭或抑制效果的评价方法。

背景技术

在油田生产中，硫酸盐还原菌（SRB）的繁殖滋生会引起许多不良后果，如油田水处理设备的腐蚀破坏、地层堵塞、油层污染等，给油田生产造成巨大损失。国内外科技工作者对控制SRB的生长进行了大量的探索，对SRB危害的监控和杀菌剂效果的检测都需要我们及时检测SRB，因而，对杀菌剂和抑制剂的应用效果的评选和及时检测就显得尤为重要。

国内外科技人员对于硫酸盐还原菌的抑制效果的检测，主要集中在3个层面：一是传统的检测方法，培养法及显微镜直接计数法；二是基因层面，基于SRB种属的16SrDNA序列的定性检测，如基因芯片以及FISH技术对SRB的定量和定性检测，APS还原酶基因和异化型亚硫酸盐还原基因进行定性检测；三是蛋白层面，主要是通过免疫吸附的原理得以实现，如已经申请专利的基于APS还原酶的SRB的快速检测试剂盒。到目前为止，还没有一种被公认较完善的检测方法。其中，显微镜技术最大的特点是快速，但需特定的染料及受过培训的操作人员。由于该技术不能分辨细菌的死活，所以检测结果往往偏高。通过检测细菌构成物测定SRB的仪器有很多，但因测定的具体构成物不同，分析结果往往有差异。随着分子生物学技术的飞速发展,分子生物学方法已经渗透到环境生物地球化学的许多领域，但是由于专业要求较高，辅助检测设备操作难度大，检测费用较高，不适于普遍适用。

培养法是我国各油田过去多年来一直采用的SRB的检测方法，它是根据API RP-38美国石油学会推荐的地下注入水分析方法中的绝迹逐渐稀释法进行的。该方法是迄今为止应用最多也是最好的方法，可靠性较高。目前，油田系统内SRB菌的计数主要执行中国石油天然气行业标准SY/T5329-94。对杀菌剂/抑制剂药效的评价也多用此法。即在一定体积的污水样中，静态或动态地加入杀菌剂/抑制剂，恒温培养若干小时后，再利用硫酸盐还原菌测试瓶做培养测试分析。这种方法存在的问题是：试验周期长，包括前期反应和后期评价两个过程，尤其在前期抑制剂的评选过程中，工作量繁琐，不能及时有效地指导生产实践。

发明内容

本发明的目的是提供一种用于快速评价硫酸盐还原菌杀灭/抑制效果的方法，可简单快速地评选杀菌剂/抑菌剂，并方便观察，去掉了加入抑制剂/杀菌剂的单独反应过程，将反应和评价过程合二为一，缩短了评价检测时间，达到快速评价抑制配方的目的。

本发明所所述的快速评价硫酸盐还原菌抑制效果的方法，是以市场上流通的、内装硫酸盐还原菌测试液的硫酸盐还原菌测试瓶为反应场所，测试液体积范围为5～10ml；或者以自行配制的、内加指示剂的适合硫酸盐还原菌优势生长的培养基为反应场所，培养基成分以质量含量为单位，由磷酸氢二钾0.1～1‰，硫酸盐1～10‰，亚铁盐0.1～1‰，氯化物1～10‰，抗坏血酸0.1～1‰，L-Cys半胱氨酸0.1～1‰，乳酸盐2～10‰和蒸馏水995.6～966‰组成，pH=6.5～7.0，该培养基经灭菌处理后装在带有密封盖的厌氧瓶中，体积范围为5～10ml；以广泛存在于土壤、海水、河水、地下管道以及油气井等缺氧或兼性厌氧环境中，以硫酸根为底物进行还原反应，适宜生长的温度为25～60℃，pH为6～9的硫酸盐还原菌为抑制对象；以生物抑制剂/化学杀菌剂/生物-化学复配抑制剂为评价对象，其中，生物抑制剂为以硝酸根/亚硝酸根为电子受体的反硝化细菌菌液及其营养液，化学杀菌剂包括氧化性杀菌剂，如氯气、次氯酸钠、漂白粉、臭氧、氯胺等；非氧化性杀菌剂，如氯化十二烷基二甲基苄基铵、溴化十二烷基二甲基苄基铵、二硫氰基甲烷等；重金属化合物，如氧化汞、氯化汞、氟化汞等；粘泥杀菌剂，如松香胺、过氧化氢、又胍聚合物等，生物-化学复配抑制剂则为上述两种或两种以上制剂的任意组合。若在3天之内，测试瓶中的铁钉没有变黑或者产生明显的黑色沉淀物，或者厌氧瓶中的带有指示作用的培养液没有变黑或产生明显的黑色沉淀物，则表明该条件下评选出来的药剂种类和浓度可在0～24h内将该污水中的硫酸盐还原菌控制在0～5mg/l。该控制指标远远低于SY-T5329-1994碎屑岩油藏注水水质推荐指标（SRB＜25个/ml）。