[发明专利]一种放射核素131I-单克隆抗体标记物的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种放射核素¹³¹I-单克隆抗体标记物的制备方法，以及通过该方法获得的放射核素¹³¹I-单克隆抗体标记物在制备用于诊断和/或治疗肿瘤的产品中的用途。 

背景技术

抗肿瘤单克隆抗体因其特异性好，结合能力强的优势，可以用于放射免疫导向治疗中作为载体运载起杀伤作用的放射核素，将抗体分子标记的放射核素在患者体内有效地运载至肿瘤局部，杀伤肿瘤，起到治疗肿瘤的重要作用。目前已经有多种特异的抗肿瘤单克隆抗体供我们悬选择，包括抗CD20抗体、抗癌胚抗原（CEA）抗体、抗表皮生长因子受体家族成员2（HER2）抗体等。而目前常用的放射性同位素有³H、¹⁴C、¹³¹I和¹²⁵I等，其中放射性碘放出γ-射线，较易获得较高效率而精确的测量，同时放射性碘的半衰期较短，尤其是¹³¹I的半衰期只有8.05天，标记物可以短时间的衰变使放射性降低以便后期处理，因而在治疗人体疾病方面及某些情况下的放射显像诊断方面，放射性¹³¹I有很大优势。 

制备高放射比度、高放射化学纯度与免疫结合活性好的放射核素 ¹³¹I-单克隆抗体标记物对于肿瘤的放射免疫导向治疗来说，无疑具有非常重要的意义。具有高度肿瘤特异性和体内靶向肿瘤特性的抗肿瘤单克隆抗体（以下简称为单抗），在标记可有效杀伤肿瘤的放射核素¹³¹I之后，在患者体内可以有效地将放射核素¹³¹I携带运载至肿瘤局部，从而有效地杀伤肿瘤，起到治疗肿瘤的作用，并可能用于某些情况下显像肿瘤。然而，想要有效地将放射核素¹³¹I携带运载至肿瘤局部，除了要求放射核素¹³¹I-单克隆抗体标记物具备高比度、高纯度等必要的药学特征外，最重要的就是要求放射核素¹³¹I-单克隆抗体标记物在标记后仍然保持良好的免疫结合活性，这样才能在体内有效地与肿瘤细胞结合， 从而将放射核素¹³¹I携带运载至肿瘤局部。 

按照现有业界公知的相关技术方法，采用适当的方法标记单克隆抗体，很容易获得高比放射性的放射核素¹³¹I-单克隆抗体标记物。常用的标记方法有：氯胺T法、乳过氧化物酶法（LPO）、Iodogen碘化法、酰化试剂（Bolton和Hunter试剂）法、NBS（溴代琥珀酰亚胺）法等。标记产物的纯化也应尽量采用温和的方法，避免在纯化操作中已受潜在损伤的蛋白质，再经标记反应时所受的损伤后活性显著降低。 

氯胺T法标记效率高、重复性好、试剂便宜易得，是目前使用最多的碘标记方法。乳过氧化物酶法（LPO）反应温和，对抗原、抗体免疫活性影响小，已被广泛应用。缺点是标记率较低，一般为20～40%。Iodogen碘化法具有标记率高、反应体积小（3ml水平）、可用低浓度的 ¹²⁵I原料、对多肽激素和蛋白质的免疫活性损失小、稳定等优点，系常规的碘化方法之一。酰化试剂（Bolton和Hunter试剂）法避免了蛋白质与氧化剂的接触，又避免了与放射性碘原子的直接接触，可防止碘源中有害物质对蛋白质的损伤，适用于标记缺乏酪氨酸的蛋白质或酪氨酸在活性中心，引入碘原子后会引起蛋白质的失活。其缺点是标记技术比较复杂，需要接触较多的放射性，经二步反应，碘标记率比较低。一般认为此法不宜标记短肽，而适于分子量大于1万的蛋白质。NBS法是近年来发展起来并已广泛应用的一种新的方法，该方法采用NBS作为氧化剂使碘离子（¹³¹I^-）氧化成分子状态的碘分子（¹³¹I²），而碘原子在0价或+1价态就能直接取代单抗分子上的酪氨酸残基上羟基邻位的氢原子，从而使¹³¹I通过取代反应共价结合在单抗的抗体分子上。其特点是标记过程温和，相对的标记损伤小，产物无毒，易于纯化。