[发明专利]凝集分析法

说明书

本申请是申请日为2006年11月13日的中国国家申请号为200680042072.6，发明名称为“凝集分析法”申请的分案申请。

发明领域

本发明涉及检测样品中的分析物的一种凝集分析法。特别是，本发明涉及基于多孔载体的分析和分析装置，包含用于进行此类分析的器的试剂盒，以及用于检测样品中分析物的分析方法。

发明背景

免疫分析是用于检测和定量样品中分析物的成熟技术。它们特别适用于作为疾病诊断和预后的辅助用于检测和/或测量生物样品中的物质，以及用于预测患者对治疗的反应。给诊断医学带来了革命的技术如放射免疫分析和酶免疫分析，建立在检测抗体-抗原相互反应的基础之上。许多检测系统是可行的，包括使用放射性或者酶标记的抗原、抗体或其复合物。很多需要与特异性底物孵育，以通过比色或荧光测量终点。

尽管这些分析是灵敏的，但检测系统经常是复杂的，并且因而是昂贵的。通常，检测系统需要若干洗脱步骤，意味着传统分析通常不适合用于及时护理现场（point-of-care）型的评估。

凝集免疫分析在现有技术中众所周知，并且依赖于结合了抗原或抗体的颗粒的凝集以指示样品中相应抗体或抗原的存在。在凝集分析的一种较简单的形式中，针对特定分析物的抗体结合到珠子或其它可见的材料上（例如，乳胶凝集反应中的聚苯乙烯微粒）。通常，抗体是二价的，因此在分析物的存在下会导致乳胶珠形成团块。这样的团块指示阳性结果，并且肉眼可见。

WO04/83859描述了一种基于毛细管的凝集分析，包括一种毛细管通路，所述毛细管通路含有能够引起与分析物的凝集的试剂系统。所述试剂系统包含结合到毛细管壁预定位置的抗体，或者结合到放置在毛细管系统预定位置的珠子上的抗体。使用该毛细管通路时，样品沿着通路流动直到其到达凝集试剂系统。若分析物存在，则发生凝集，阻碍样品沿管子的进一步流动。施加样品预定的时间后，如果没有样品可以检测，而通路下游用于样品存在的检测器受到影响，则存在分析物，从而显示一个阳性的结果。该装置使用乳胶珠作为凝集器。

对于更加接近患者进行分析的需求正在增长，主要是为了缩短提供结果所花的时间。此类分析誉为护理现场分析，并且通常需要牢靠和简单地实施，因为它们在非实验室的环境、通常由非专业人员进行。理想地，它们应该是自足式的并且不需要辅助设备（除了可能的读数器的例外）。如果护理现场分析要有任何临床用途，它们需要与基于实验室的分析的灵敏度相似。然而，传统的免疫分析通常包含复杂的操作规范和检测系统，这就意味着它们通常不适合用于护理现场型的应用。

特定的护理现场分析已被开发出来。最常见的是侧流分析。通常，它们基于标记的移动组分（例如，有色彩的颗粒标记的抗体）、固定组分（例如，抗体条或点）以及膜，通过该膜导致样品在毛细作用下移动。在分析物存在下，在固定的抗体捕获区形成“夹心”，从而产生彩色的线或点。传统的侧流分析在例如Unilever Patent HoldingsB.Vd(US5,656,503)中举例说明。这些分析规定了固定的抗体捕获区，虽然是侧流的形式而不是Gelgel等人教示的放射形式（Clin Chem28(9)pp1894-8,1982）。

侧流分析提供了诸多优点，包括速度、便捷性以及较低的成本。但是，它们有几个缺点。抗体通常通过吸附到膜上而被固定，因此膜和/或抗体批次的变化会导致所固定的抗体量的变化。而且，一些抗体可能仅仅是松散结合的，当流体正面经过时可能会移动，从而导致信号的丢失。并且，由于一种抗体是固定的，它和分析物反应的仅有时间是样品流经的时间，因此会由于孵育时间短而降低灵敏度。还需要为每一分析物生产特定的包被膜，因而增加了制造成本。

为了解决这些缺点，已经尝试避免使用固定的捕获抗体。例如，Miles(EP 297292)、Hygeia Sciences(EP 310872)和Mizuho(EP 0962771)描述的系统，包括带有捕集区的膜，所述捕集区连接有2种抗体包被的颗粒，一种没有标记但是大，因此能够被该区捕集，另一个小并且被标记，能够通过该区。在分析物存在时，小珠子变成与被捕集的大珠子结合，从而形成彩色线。尽管这些方法避免了使用固定的捕获抗体，但除了捕集区之外，它们还需要两组抗体包被的颗粒。通常此类颗粒是疏水的性质，并且在生物流体的存在下能够引起非异性方式的凝聚。