[发明专利]针对肝细胞生长因子的人源化单克隆抗体

说明书

本申请是申请日为2007年3月28日的中国专利号为200780012367.3、发明名称为“针对肝细胞生长因子的人源化单克隆抗体”申请的分案申请。

相关申请的交叉引用

本申请是2006年4月1日提交的USSN60/788,243的非临时的申请，上述临时申请为所有目的以其全文引为参考。

政府权益陈述

本申请中描述的工作部分由国立卫生研究院（National Institutes of Health）拨款2R44CA101283-02的资助。美国政府在本发明中享有确定的权利。

发明领域

本发明总的来说涉及将单克隆抗体（Mtb）和重组DNA技术相结合来开发新的生物制品，更具体来说，例如，涉及了结合和中和肝细胞生长因子的人源化单克隆抗体的生产。

发明背景

人类肝细胞生长因子（HGF）是间充质细胞产生的多功能的异二聚体多肽。HGF已经被显示出刺激血管生成、形态发生和活动发生（motogenesis），以及各种不同细胞类型的生长和播散（Bussolino等，J.Cell.Biol.119:629,1992；Zarnegar和Michalopoulos，J.Cell.Biol.129:1177,1995；Matsumoto等，Ciba.Found.Symp.212:198,1997；Birchmeier和Gherardi，Trends Cell.Biol.8:404,1998；Xin等，Am.J.Pathol.158:1111,2001）。HGF多效的活性是通过它的受体—原癌基因cMet编码的跨膜酪氨酸激酶来介导的。除了调节各种正常的细胞功能之外，HGF及其受体c-Met已经显示参与了肿瘤的启动、浸润和转移（Jeffers等，J.Mol.Med.74:505,1996；Comoglio和Trusolino，J.Clin.Invest.109:857,2002）。在各种的人类实体肿瘤，包括源于肺、结肠、直肠、胃、肾、卵巢、皮肤、多种骨髓瘤和甲状腺组织的肿瘤上，HGF/cMet是共表达的，通常是过表达的（Prat等，Int.J.Cancer49:323,1991；Chan等，Oncogene2:593,1988；Weidner等，Am.J.Respir.Cell.Mol.Biol.8:229,1993；Derksen等，Blood99:1405,2002）。HGF的功能是作为这些肿瘤的自分泌（Rong等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA91:4731,1994；Koochekpour等，Cancer Res.57:5391，1997）和旁分泌生长因子（Weidner等，Am.J.Respir.Cell.Mol.Biol.8:229,1993）和抗凋亡调节因子（Gao等，J.Biol.Chem.276:47257,2001）。

HGF是102kDa的蛋白，序列和结构类似于纤溶酶原和其它凝血酶（Nakamura等，Nature342:440,1989；Weidner等，Am.J.Respir.Cell.Mol.Biol.8:229,1993）。人类HGF被合成为728个氨基酸的前体（preproHGF）合成，它经过细胞内裂解成为无活性的单链的形式（proHGF）（Nakamura等，Nature342:440,1989；Rosen等，J.Cell.Biol.127:1783,1994）。细胞外分泌之后，proHGF被裂解，产生了由α-亚基和β-亚基构成的具有生物活性的二硫键连接的异二聚体分子（Nakamura等，Nature342:440,1989；Naldini等，EMBO J.11:4825,1992）。α-亚基含有440个残基（糖基化后为69kDa），由N-末端发夹结构域和4个三环结构域组成。β-亚基含有234个残基（34kDa），并具有丝氨酸蛋白酶样结构域，但是不具有蛋白水解活性。HGF具有两个独特的细胞特异性结合位点：cMet受体的高亲和性（Kd=2x10^-10M）结合位点和硫酸乙酰肝素蛋白多糖（HSPG）的低亲和性（Kd=10^-9M）结合位点，它们存在于细胞表面和细胞外基质上（Naldini等，Oncogene6:501,1991；Bardelli等，J.Biotechnol.37:109,1994；Sakata等，J.Biol.Chem.,272:9457,1997）。