[发明专利]一种脑栓通制剂HPLC指纹图谱的构建方法及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及药物分析技术领域，特别涉及一种以天然植物药材原料制成的脑栓通制剂HPLC指纹图谱的构建方法及其应用。

背景技术

国际社会对药品的要求是“安全、有效、可控”。现行的中药质量标准，对中成药的质量控制是以传统的性状鉴别和显微鉴别确定真伪，以理化鉴别评价优劣，少数药味对其1~2个指标成分进行检测和控制。从传统中医药观点来看，检测任何一种活性成分均不能反映复方制剂所体现的整体疗效，中医辨证施治用的是药味而非某个化学成分。指纹图谱是基于对中药物质群整体作用的认识，借助于波谱和色谱等技术获得中药化学成分的光谱或色谱图，采用“共有峰”的方式来判断相似程度从而达到控制目的。可利用指纹图谱表达成品的质量、实现对工艺操作和原药材的质控；也可利用指纹追根溯源来寻找工艺操作中的问题和实现对原药材GAP的质量要求。

脑栓通制剂是中药复方制剂，由蒲黄、赤芍、郁金、天麻、漏芦五味药材组成，具有活血通络、祛风化痰的功效，用于风痰淤血痹阻脉络引起的缺血性中风病中经络急性期和恢复期。由于在脑栓通制剂的生产过程中，赤芍、郁金2味药材采用醇提工艺，蒲黄、天麻、漏芦3味药材采用水提醇沉工艺，故其成品中成分既有脂溶性成分又有水溶性成分，成分复杂，极性相差大。但目前脑栓通制剂的质量标准不完善，缺乏全面有效的质量控制方法，难以全面监控成品的质量、全面监控生产工艺的稳定性。现行质量标准“鉴别”项采用薄层色谱法对处方中的蒲黄、天麻、赤芍、漏芦4味药材进行鉴别，“含量测定”项采用高效液相色谱法测定臣药赤芍中芍药苷的含量，其不足之处在于：该标准操作繁琐，没有对郁金进行检测；单一测定方法给出信息少，没有对五味药材中的化学成分进行全面、系统的检测。

发明内容

本发明的目的是克服上述现有技术中的不足，通过对脑栓通制剂HPLC指纹图谱构建方法的研究，提供一种有效可靠的脑栓通制剂的质量控制方法及其应用。

本发明的技术方案如下所述：本发明公开的脑栓通制剂HPLC指纹图谱的构建方法，包括构建脑栓通制剂HPLC指纹图谱一和脑栓通制剂HPLC指纹图谱二，通过HPLC指纹图谱一和HPLC指纹图谱二共同组成了完整的脑栓通制剂的指纹图谱特征。

所述脑栓通制剂HPLC指纹图谱一的构建方法包括以下步骤：

(1)供试品溶液的制备：精密称取脑栓通制剂1.0g～10.0g，用甲醇提取，滤过，取滤液适量，蒸干，用甲醇配成脑栓通制剂供试品溶液一，优选用30%的甲醇溶液配制,；

(2)采用高效液相色谱法分析供试品溶液和对照品溶液，得到HPLC指纹图谱一，色谱条件为：进样量5～30μl；色谱柱为ODS C₁₈，3μm；流动相为乙腈-四氢呋喃-磷酸水溶液；梯度洗脱；0～70分钟，流动相乙腈-四氢呋喃-磷酸水溶液由2:0:98渐变为20:10:70；柱温20°C；检测波长0～53min为254nm，于53min后将波长切换为275nm。

所述步骤（1）更具体为：取本品内容物适量，混匀，取约2.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，称定重量，超声处理(功率250W，频率40kHz)30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过。(1)精密量取续滤液20ml，减压回收溶剂至干，残渣加30%甲醇溶解并转移至10ml量瓶中，加30%甲醇稀释至刻度，摇匀，离心，取上清液，用0.45μm微孔滤膜滤过，作为成品供试品溶液一。

所述脑栓通制剂HPLC指纹图谱一利用中药色谱指纹图谱相似度评价系统检测出27个共有色谱峰，归属于蒲黄的共有色谱峰有5个峰，分别为1号峰、3号峰、12号峰、20号峰、22号峰；归属于赤芍的共有色谱峰有10个峰，分别为5号峰、7号峰、11号峰、15号峰、16号峰、21号峰、23号峰、24号峰、25号峰、27号峰；归属于天麻的共有色谱峰有1个峰为6号峰；归属于漏芦的共有色谱峰有6个峰，分别为10号峰、13号峰、14号峰、18号峰、19号峰、26号峰6；归属于郁金的共有色谱峰有一个峰为9号峰，不归属于任何药材的共煎成分色谱峰有4个峰，分别为2号峰、4号峰、8号峰、17号峰。

所述脑栓通制剂HPLC指纹图谱一的构建方法还包括以下步骤：

(1)对照品溶液的制备：精密称取香蒲新苷、异鼠李素-3-O-新橙皮苷、芍药苷、天麻素、β-蜕皮甾酮适量，加甲醇使溶解，制成混合对照品溶液，其中香蒲新苷、异鼠李素-3-O-新橙皮苷、芍药苷、天麻素、β-蜕皮甾酮的浓度分别为0.01～3mg/ml；