[发明专利]一种脑栓通制剂HPLC指纹图谱的构建方法及其应用

权利要求书

1.一种脑栓通制剂HPLC指纹图谱的构建方法，其特征在于：包括构建脑栓通制剂HPLC指纹图谱一和脑栓通制剂HPLC指纹图谱二，通过HPLC指纹图谱一和HPLC指纹图谱二共同组成了完整的脑栓通制剂的指纹图谱特征。

2.如权利要求1所述的脑栓通制剂HPLC指纹图谱的构建方法，其特征在于所述脑栓通制剂HPLC指纹图谱一的构建方法包括以下步骤：

(1)供试品溶液的制备：精密称取脑栓通制剂1.0g～10.0g，用甲醇提取，滤过，取滤液适量，蒸干，用甲醇配成脑栓通制剂供试品溶液一；

(2)采用高效液相色谱法分析供试品溶液，得到HPLC指纹图谱一，色谱条件为：进样量5～30μl；色谱柱为ODS C₁₈，3μm；流动相为乙腈-四氢呋喃-磷酸水溶液；梯度洗脱；0～70分钟，流动相乙腈-四氢呋喃-磷酸水溶液由2:0:98渐变为20:10:70；柱温20°C；检测波长0～53min为254nm，于53min后将波长切换为275nm。

3.如权利要求2所述的脑栓通制剂HPLC指纹图谱的构建方法，其特征在于：所述脑栓通制剂HPLC指纹图谱一利用中药色谱指纹图谱相似度评价系统检测出27个共有色谱峰，归属于蒲黄的共有色谱峰有5个峰，分别为1号峰、3号峰、12号峰、20号峰、22号峰；归属于赤芍的共有色谱峰有10个峰，分别为5号峰、7号峰、11号峰、15号峰、16号峰、21号峰、23号峰、24号峰、25号峰、27号峰；归属于天麻的共有色谱峰有1个峰为6号峰；归属于漏芦的共有色谱峰有6个峰，分别为10号峰、13号峰、14号峰、18号峰、19号峰、26号峰6；归属于郁金的共有色谱峰有1个峰为9号峰，不归属于任何药材的共煎成分色谱峰有4个峰，分别为2号峰、4号峰、8号峰、17号峰。

4.如权利要求2所述脑栓通制剂HPLC指纹图谱的构建方法，其特征在于所述脑栓通制剂HPLC指纹图谱一的构建方法还包括以下步骤：

(1)对照品溶液的制备：精密称取香蒲新苷、异鼠李素-3-O-新橙皮苷、芍药苷、天麻素、β-蜕皮甾酮适量，加甲醇使溶解，制成混合对照品溶液，其中香蒲新苷、异鼠李素-3-O-新橙皮苷、芍药苷、天麻素、β-蜕皮甾酮的浓度分别为0.01～3mg/ml；

（2）采用高效液相色谱法分析供对照品溶液，得到对照品指纹图谱，色谱条件为：进样量5～30μl；色谱柱为ODS C₁₈，3μm；流动相为乙腈-四氢呋喃-磷酸水溶液；梯度洗脱；0～70分钟，流动相乙腈-四氢呋喃-磷酸水溶液由2:0:98渐变为20:10:70；柱温20°C；检测波长0～53min为254nm，于53min后将波长切换为275nm；

（3）利用DAD检测器和RRLC/MS/MS技术手段对HPLC指纹图谱一和对照品指纹图谱的色谱峰进行色谱峰归属及峰纯度检测，通过UV吸收曲线的比较确定：6号峰为天麻素、7号峰为没食子酸、11号峰为氧化芍药苷、13号峰为筋骨草素C、15号峰为芍药苷、18号峰为β-蜕皮甾酮、20号峰为香蒲新苷、21号峰为没食子酰基芍药苷或没食子酰基芍药内酯苷或二者的异构体、22号峰为异鼠李素-3-O-新橙皮苷、25号峰为苯甲酰氧芍药苷。

5.如权利要求1所述的脑栓通制剂HPLC指纹图谱的构建方法，其特征在于所述脑栓通制剂HPLC指纹图谱二的构建方法包括以下步骤：

(1)供试品溶液的制备：精密称取脑栓通制剂1.0g～10.0g，用甲醇提取，滤过，取滤液适量，蒸干，适当净化，用甲醇配成脑栓通制剂供试品溶液二；

(2)采用高效液相色谱法分析上述供试品溶液，得到脑栓通制剂HPLC指纹图谱二，色谱条件为：进样量5～30μl；色谱柱为ODS C₁₈，3μm；流动相为乙腈-磷酸水溶液；梯度洗脱；0～5分钟，流动相乙腈-磷酸水溶液由30:70渐变为55:45，5～20分钟流动相乙腈-磷酸水溶液为55:45；柱温25°C；检测波长390nm。

6.如权利要求5所述脑栓通制剂HPLC指纹图谱的构建方法，其特征在于：所述脑栓通制剂HPLC指纹图谱二利用中药色谱指纹图谱相似度评价系统检测出5个共有色谱峰，归属于郁金的共有色谱峰为5号峰。

7.如权利要求6所述脑栓通制剂HPLC指纹图谱的构建方法，其特征在于：利用DAD检测器和RRLC/MS/MS技术手段对色谱峰进行峰归属：2号峰为去甲氧基姜黄素。