[发明专利]一种脂肪酶突变体及其用途

权利要求书

1.一种脂肪酶突变体，该突变体氨基酸序列具有与SEQ ID NO.02蛋白质氨基酸序列至少有85％序列同一性，并且对应于SEQ ID NO.2的189位残基为芳香族氨基酸残基，对应于SEQ ID NO.2的190位残基为非极性氨基酸残基。

2.如权利要求1所述的脂肪酶突变体，所述的芳香族氨基酸残基为Phe或Tyr，优选Phe，所述的非极性氨基酸残基为Ala、Val、Leu、Ile、Pro、Phe、Trp或Met，优选Leu或Ile。

3.如权利要求2所述的脂肪酶突变体，包括如下一个或多个氨基酸残基：39位为非极性氨基酸残基；40位残基为非极性氨基酸残基；138位残基为极性不带电荷氨基酸残基；139位残基为极性不带电荷氨基酸残基；152位残基为极性带正电荷的氨基酸残基；154位残基为非极性氨基酸残基；157位残基氨基酸残基为极性氨基酸残基。

4.如权利要求3所述脂肪酶突变体，所述的39位残基为Ala或Val；40位残基为Ala或Val；138位残基为Ser、Cys；139位残基为Tyr、His者Arg；152位残基为Lys或His；154残基位为Gly或Ala；157位残基为Ser、Thr、Asp或Gly。

5.如权利要求4所述脂肪酶突变体，其特征在于，138位残基为Ser；139位残基为Tyr。

6.如权利要求4所述脂肪酶突变体，其特征在于， 138位残基为Ser， 139位残基为His。

7.如权利要求4所述脂肪酶突变体，其特征在于， 154位残基为Gly， 157位残基为Asp。

8.如权利要求4所述脂肪酶突变体，其特征在于，152位残基为His；154位残基为Gly； 157位残基为Ser。

9.如权利要求1所述脂肪酶突变体，其氨基酸序列如SEQ ID NO. 4，6，8，10，12，14，16，18，20，22，24，26，28，30，32，34，36，38，40或42所示。

10.一种核酸，其能够编码权利要求1-9中任一项所述的脂肪酶突变体。

11.如权利要求10所述的核酸，其氨基酸序列如SEQ ID NO. 3，5，7，9，11，13， 15，17，19，21，23，25，27，29，31，33，35，37，39或41所示。

12.一种表达载体，该载体含有权利要求10或11所述的核酸且能在宿主细胞中进行表达。

13.一种宿主细胞，其含有权利要求10或11的核酸或权利要求12所述的的表达载体。

14.如权利要求13所述的宿主细胞，该宿主细胞是毕氏酵母。

15.权利要求1-9中任一项所述的脂肪酶突变体在动力学拆分手性羧酸酯类化合物中的应用。

16.如权利要求15所述的应用，其特征在于所述的应用包括下述方法：在pH 5-9的磷酸盐缓冲液溶液中，在权利要求1-9任一项所述的脂肪酶突变体的催化下，手性羧酸酯类化合物进行水解，生成光学活性手性羧酸。

17.如权利要求15或16所述的应用，其特征在于，所述的手性羧酸酯类化合物为如式（I）所示的化合物，

其中R1为烷基、苯基、带有取代的苯基，苯基的取代基为卤素、烷基、苯基或带有取代的苯基、杂环等；

R2为烷基；

R3为烷基、苯基或带有取代的苯基，苯基的取代基为卤素、烷基或硝基。

18.如权利要求16-17任一项所述的应用，其特征在于，所述的手性羧酸酯类化合物为布洛芬类化合物的酯衍生物，其结构如式（II）所述，布洛芬类化合物为布洛芬、氟比洛芬、阿利洛芬、非诺洛芬、萘普生或酮洛芬，

其中R1为式（III）所述结构；

R2为烷基、苯基或带有取代的苯基，苯基的取代基为卤素、烷基或硝基。