[发明专利]达玛烷型三萜类化合物及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明属于三萜类化合物及其制备和应用领域，特别涉及从四倍体绞股蓝中提取分离得到的达玛烷型三萜皂苷类化合物及其制备方法和用途。

背景技术

绞股蓝(Gynostemma pentahyllum(Thunb.)Makino)是葫芦科(Cucurbitaceae)绞股蓝属多年生草质藤本植物。目前已知的关于绞股蓝的文献报道最早见于我国明代《救荒本草》中将绞股蓝用做野菜的记载“采叶炸熟，水浸去邪味涎沫，淘洗净，油盐调食”。20世纪70年代以来，人们对绞股蓝的化学成分、药理作用以及在临床、保健方面的应用进行了广泛的现代研究和开发，发现绞股蓝具有降血糖、降血脂、改善心脑血管系统、增强机体免疫力以及抗肿瘤等诸多生物活性，而三萜皂苷类化合物被认为是绞股蓝的主要生物活性成分。绞股蓝所含皂苷的种类和含量因其品种的不同而显示出较大的差异性，目前已经从各种不同品种的绞股蓝中分离得到多达160余种的三萜皂苷，其苷元主要是达玛烷型四环三萜，但至今，尚未见关于从四倍体绞股蓝中分离得到的具有抗炎活性的达玛烷型三萜类化合物的相关报道。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供从四倍体绞股蓝中提取分离得到的达玛烷型三萜皂苷类化合物及其制备方法和用途，该化合物及它们的光学异构体、药用盐类衍生物、溶剂合物具有制备抗炎药物的用途，它们可以以其自身的形式施用，也可以和药学上可以接受的载体组成药物组合物而应用；且制备方法简单易行，所得化合物纯度高，具有良好经济效益和工业化应用前景。

本发明的达玛烷型三萜类化合物，所述达玛烷型三萜类化合物为式I所示化合物或其光学异构体。

本发明的达玛烷型三萜类化合物，所述达玛烷型三萜类化合物为式II所示化合物或其光学异构体。

本发明的上述两种达玛烷型三萜类化合物在制备抗炎药物中的应用。

本发明的上述两种达玛烷型三萜类化合物的制备方法，包括：

(1)将四倍体绞股蓝全草用溶剂提取，浓缩提取液得浸膏；

(2)将浸膏加水溶解得分散液，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇进行萃取，萃取后得到正丁醇萃取液，减压回收溶剂，得正丁醇部位浸膏；

(3)将正丁醇部位浸膏与硅胶拌样，上样于硅胶柱上，先以二氯甲烷-甲醇溶液为洗脱剂进行梯度洗脱，减压回收溶剂后再次进行硅胶柱色谱层析，用乙酸乙酯-甲醇溶液进行梯度洗脱，收集洗脱液，减压回收溶剂后进行ODS填料中压柱色谱，以甲醇-水溶液系统进行梯度洗脱，收集含所述化合物的流份，再经硅胶色谱柱层析，用三氯甲烷-甲醇溶液系统梯度洗脱，减压回收溶剂；最后通过半制备型反相高效液相色谱用65vol％甲醇-水溶液进行分离纯化，得到所述化合物I和II。

所述步骤(1)中为将四倍体绞股蓝全草用溶剂提取2～5次，每次1～3小时，浓缩提取液得浸膏；

所述步骤(1)中的溶剂选自甲醇、乙醇、丙酮、水中的一种或多种的混合物；

所述步骤(2)中的浸膏与水的质量比为1∶2～1∶15。

所述步骤(2)中石油醚的加入量与分散液的体积比为1∶2～5∶1；

所述步骤(2)中乙酸乙酯的加入量与分散液的体积比为1∶2～5∶1；

所述步骤(2)中正丁醇的加入量与分散液的体积比为1∶2～5∶1。

根据本领域公知的筛选对脂多糖(LPS)诱导的RAW246.7小鼠巨噬细胞中IL-1β，TL-6和COX-2mRNA表达水平有抑制作用的化合物的方法，研究发现化合物I和II以及它们的光学异构体、药用盐类衍生物、溶剂合物均能显著抑制脂多糖(LPS)引起的小鼠巨噬细胞RAW 264.7中IL-1β，IL-6和COX-2mRNA的表达水平，且多呈剂量依赖关系，化合物II的高浓度组(100μg/ml)还表现出较强的细胞毒作用，表明本发明化合物具有明显的抗炎活性。

采用有效剂量的本发明所述的化合物I和II及它们的光学异构体、药用盐类衍生物、溶剂合物的一种或多种作为活性成分与常规药用载体制备成药物组合物，可以按常规方法制备成口服或注射用途的常规剂型。通常的，载体包括稀释剂、填充剂、崩解剂、润滑剂、着色剂、调味剂或其它常规添加剂中的一种或多种。

有益效果

(1)本发明通过从四倍体绞股蓝中提取分离得到了两种达玛烷型三萜类化合物，该化合物及它们的光学异构体、药用盐类衍生物、溶剂合物具有制备抗炎药物的用途，它们可以以其自身的形式施用，也可以和药学上可以接受的载体组成药物组合物而应用；