[发明专利]检测急性B淋巴细胞白血病相关免疫表型的试剂盒及其应用

说明书

技术领域

    本发明属于细胞表型确认过程中的专用试剂盒，具体涉及一种检测急性B淋巴细胞白血病相关免疫表型的试剂盒及其应用。

背景技术

随着治疗策略的改进和新的化疗药物不断出现，急性淋巴细胞白血病（Acute lymphoblastic leukemia，ALL）的缓解率和生存率有了很大的提高，但是仍有一部分患者预后较差，最终死于复发。复发后即使采用强化疗、甚至造血干细胞移植，仍然难以挽回患者的生命，给社会和家庭都造成了极其沉重的精神和经济负担。研究证明，治疗后微量残留病（MRD）的水平是复发的根源。

多参数流式细胞术（flow cytometry， FCM）是MRD检测的常用方法之一，该方法是根据患者发病时的免疫标志，确定该患者白血病细胞的特异性标志，亦称为白血病相关免疫表型（LAIP），通过对LAIP的识别来检测MRD。

目前，国内外的文献主要采用三色或四色的抗体组合来检测LAIP，不同的研究机构采用不同的抗体组合，抗体选择多样化、分析时设门的方法也不一致。例如，欧洲主要报道了5组三色的抗体组合，共应用15个抗体；美国St.jude儿童研究医院则利用多组四色抗体组合。

为了提高检测的灵敏度，三色FCM或四色FCM常常需要多组抗体组合，每组抗体组合中均有相同的抗体，这样一方面增加了抗体总数目，进而增加了试验成本和患者的经济负担；另一方面多组抗体组合需要在多管中分别检测，影响了对检测抗体的多参数分析：在分析LAIP时，有时需要多个标志设门来限定一群细胞，例如第一管抗体组合中发现一群可疑LAIP阳性细胞，表型为CD45⁺CD19⁺CD10⁺CD34^-，但此群细胞数较低（＜10^-4），此时往往需要观察此群细胞中其他抗原是否表达异常，以确定是否存在LAIP；但四色组合无法同时检测第4种以外的抗体，从而影响了检测的准确性；若要观察此群细胞的第五种或其他的抗原表达是否有异常，利用四色FCM则无法完成。为了提高LAIP检测的灵敏度，需要能够同时检测多个荧光参数的FCM、以及设计合适的更多荧光参数的抗体组合。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种检测急性B淋巴细胞白血病相关免疫表型的试剂盒及其应用，所述试剂盒采用七种荧光标记的抗体组合，利用该剂盒、并借助七色流式细胞仪的辅助，可快速准确地分析LAIP的种类、性质及判断LAIP阳性细胞水平，对预后判断和临床治疗方案的制定具有重要的指导意义。

为解决上述技术问题，本发明采取的技术方案是：

一种检测急性B淋巴细胞白血病相关免疫表型的试剂盒，与七色流式细胞仪组成白血病相关免疫表型分类装备，该试剂盒中配置了下述单克隆抗体试剂组合：CD58、CD10、CD34、CD123、CD38、CD19和CD45。

优选的，所述单克隆抗体试剂组合CD58、CD10、CD34、CD123、CD38、CD19和CD45依前后排列顺序依次进行特异性荧光素标记为：FITC、PE、Percp-CY5.5、PE-CY7、APC、APC-Cy7和Pacific Blue。

本发明还提供了上述试剂盒在制备检测急性B淋巴细胞白血病相关免疫表型的产品中的应用。

借助于上述的试剂盒和七色流式细胞仪对急性B淋巴细胞白血病相关免疫表型进行分析的方法，包括下述步骤：

步骤一、试剂配制

1.1、配制pH为7.2~7.4的10×PBS缓冲液，并稀释10倍成为1×PBS缓冲液，

1.2、取溶红细胞液，并用1×PBS缓冲液稀释10倍，

1.3、取小牛血清加入至1×PBS缓冲液中，制备含0.5wt.%~2wt.%血清的PBS；

步骤二、对骨髓标本进行荧光标记，制备测试标本

2.1在同一专用试管中，依次分别加入荧光标记的单克隆抗体如下：3μLCD58-FITC、10μLCD10-PE、1μL CD34-PerCP-CY5.5、1μLCD123-PE-CY7、2μL CD38-APC、5μL CD19-APC-Cy7和1.3μL CD45-Pacific Blue，然后再加入100μL骨髓标本，混匀，室温避光放置15分钟孵育，

2.2、加入步骤1.2中稀释后的溶红细胞液2mL，混匀后避光，室温放置 8分钟，溶解红细胞，