[发明专利]检测急性B淋巴细胞白血病相关免疫表型的试剂盒及其应用

权利要求书

1.一种检测急性B淋巴细胞白血病相关免疫表型的试剂盒，与七色流式细胞仪组成白血病相关免疫表型分类装备，其特征在于该试剂盒中配置了下述单克隆抗体试剂：CD58、CD10、CD34、CD123、CD38、CD19和CD45。

2.根据权利要求1所述的检测急性B淋巴细胞白血病相关免疫表型的试剂盒，其特征在于所述单克隆抗体试剂CD58、CD10、CD34、CD123、CD38、CD19和CD45依前后排列顺序依次进行特异性荧光素标记为：FITC、PE、Percp-CY5.5、PE-CY7、APC、APC-Cy7和Pacific Blue。

3.根据权利要求1所述的检测急性B淋巴细胞白血病相关免疫表型的试剂盒，其特征在于所述试剂盒中还设置了溶红细胞液和pH为7.2~7.4的10×PBS缓冲液。

4.根据权利要求3所述的检测急性B淋巴细胞白血病相关免疫表型的试剂盒，其特征在于所述试剂盒中还设置了配套计量的小牛血清试剂。

5.根据权利要求1~4任意一项所述试剂盒在制备检测急性B淋巴细胞白血病相关免疫表型的产品中的应用。

6.借助于权利要求4所述的试剂盒和七色流式细胞仪对急性B淋巴细胞白血病相关免疫表型进行分析的方法，其特征在于该方法包括下述步骤：

步骤一、试剂配制

1.1、配制pH为7.2~7.4的10×PBS缓冲液，并稀释10倍成为1×PBS缓冲液，

1.2、取溶红细胞液，并用1×PBS缓冲液稀释10倍，

1.3、取小牛血清加入至1×PBS缓冲液中，制备含0.5wt.%~2wt.%血清的PBS；

步骤二、对骨髓标本进行荧光标记，制备测试标本

2.1在同一专用试管中，依次分别加入荧光标记的单克隆抗体如下：3μL CD58-FITC、10μL CD10-PE、1μL CD34-PerCP-CY5.5、1μL CD123-PE-CY7、2μL  CD38-APC、5μL CD19-APC-Cy7和1.3μL CD45-Pacific Blue，然后再加入100μL骨髓标本，混匀，室温避光放置15分钟孵育，

2.2、加入步骤1.2中稀释后的溶红细胞液2mL，混匀后避光，室温放置 8分钟，溶解红细胞，

2.3、1500转/分离心5分钟，弃上清液，加入步骤1.3中2mL含0.5wt.%~2wt.%血清的PBS，混匀，

2.4、1500转/分离心5分钟，弃上清液，加入步骤1.1中0.3mL1× PBS缓冲液，混匀，制成待测标本；

步骤三、按照七色流式细胞仪的操作要求对待测标本进行处理后检测，获得特异性荧光标记的骨髓细胞数据，用MACSQuant分析软件、在SSC/CD19和CD45/CD19双参数点图中对CD19⁺细胞进行连续两次设门，并进一步在CD19⁺细胞中对CD19⁺CD38^强+的浆细胞设门以去除浆细胞，最终的CD19⁺B细胞为待测的细胞，并与正常骨髓细胞CD19⁺B祖细胞表型进行比较。