[发明专利]唐氏综合征21号染色体相关miRNA、基因、筛选方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及基因工程领域，尤其涉及一种与唐氏综合征21号染色体相关的miRNA、基因、筛选方法和应用。

背景技术

唐氏综合征(Down syndrome，简称DS)又叫21三体（Trisomy 21，Ts21）综合征，因多出一条或部分21号染色体而导致的一种出生缺陷型疾病。约每700例婴儿中就有1例。患者表现为先天性智力低下、精神迟钝、体格发育不全和先天性心脏缺陷等80多种临床症状。生物学研究已发现21号染色体上含有500多个基因，包括5个miRNA（microRNA，微小RNA）基因：miR-99a、let-7c、miR-125b-2、miR-155和miR-802。miRNA是一类长度为19~25个核苷酸的内生性单链非编码调节RNA。miRNA可与靶基因mRNA的3’端特异性结合，使其降解或转录抑制，在细胞的增值、分化、凋亡、胚胎的发育和组织的分化等生物学过程中具有非常重要的作用。研究表明21号染色体上5个miRNA的过表达均与DS患者各种临床性状有关，如智力缺陷、儿童白血病、免疫缺陷、低血压等。但与21号染色体相关的miRNA还有很多，因此，研究这些miRNA，特别是与唐氏综合征特异性相关的miRNA具有重要的研究价值。

发明内容

基于此，有必要提供一种与唐氏综合征21号染色体相关的miRNA、基因、筛选方法和应用。

一种与唐氏综合征21号染色体相关的miRNA基因，具有如SEQ ID NO.1的核苷酸序列。

一种与唐氏综合征21号染色体相关的miRNA的前体，具有如SEQ ID NO.2的核苷酸序列。

一种与唐氏综合征21号染色体相关的miRNA，具有如SEQ ID NO.3的核苷酸序列。

上述miRNA、其基因及其前体基因在制备诊断或检测唐氏综合征试剂中的应用。

上述miRNA、其基因及其前体基因在制备诊断或检测唐氏综合征基因检测芯片中的应用。

一种唐氏综合征21号染色体相关miRNA的筛选方法，包括如下步骤：

分别采集唐氏综合征胎儿和正常胎儿的脐带血单个核细胞样品；

提取所述样品中的总RNA，用变性聚丙烯胺凝胶电泳分离回收长度不大于30个核苷酸的小RNA，在T4RNA连接酶的作用下，在回收的小RNA的5’端加上如SEQ ID NO.4的核苷酸序列接头，3’端加上如SEQ ID NO.5的核苷酸序列接头，经TBE聚丙烯胺凝胶电泳纯化后，经Solexa小RNA反转录引物和PCR扩增后制成小RNA的cDNA文库，再使用TBE聚丙烯胺凝胶电泳对所述cDNA文库进行纯化并进行测序分析；

对测序后所得的小RNA分子进行去接头和去污染处理，并从中筛选出长度为18~30nt的核苷酸序列，用SOAP软件将所得序列与人全基因组序列进行比对分析，将匹配上的序列按照GenBank>Rfam>miRBase17.0>repeat>exon>intron的优先级顺序进行分类注释，然后将intron和未比对上序列的小RNA分子序列作为新miRNA的数据源，用MIREAP和MiPred两种软件对所述新miRNA所在的染色体进行分析，得到所述唐氏综合征21号染色体相关miRNA。

上述唐氏综合征21号染色体相关miRNA或其前体是与唐氏综合征患者特异性相关的miRNA，进一步研究发现，其与基因的表达、细胞分化的调节、胚胎形态的发生和心脏的发育有关。因此，该新的miRNA的发现，为进一步研究21号染色体的功能，探索唐氏综合征患者新的治疗靶点提供了实验理论基础和新的方向，并可应用在制备诊断或检测唐氏综合征患者试剂的领域，为唐氏综合征疾病的诊断和检测提供简便的手段。

附图说明

图1为一实施方式的唐氏综合征胎儿的脐带血染色体核型分析结果图；

图2为正常胎儿的脐带血染色体核型分析结果图；

图3为miR-nov21在21号染色体上的座位分析图。

具体实施方式

下面主要结合具体实施例和附图对唐氏综合征21号染色体相关miRNA、基因、筛选方法和应用作进一步详细的说明。

一实施方式的筛选方法、结果及相关检测包括如下步骤：

1、筛选

1.1、样本收集及胎儿脐带血的采集和保存