[发明专利]一种肿瘤相关抗原CA125的纳米磁微粒化学发光测定试剂盒及其制备方法和检测方法

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种结合了免疫磁微粒分离技术和化学发光免疫分析技术的肿瘤相关抗原CA125的纳米磁微粒化学发光测定试剂盒及其制备方法和检测方法。

背景技术

肿瘤相关抗原CA125(Carbohydrate Antigen，CA125)是一种与上皮性卵巢癌相关的高分子量糖蛋白。CA125是卵巢上皮癌和子宫内膜癌的标志物，国内外报导其敏感性和特异性分别在85-95%和75-90%之间。浆液性子宫内膜癌、透明细胞癌、输卵管癌及未分化卵巢癌患者的CA125含量，均可明显升高。CA125血清浓度轻微上升还见于1％健康妇女，3％-6％良性卵巢疾患或非肿瘤患者，包括孕期起始3个月、行经期、子宫内膜异位、子宫纤维变性、急性输卵管炎、肝病、胸腹膜和心包感染等。

卵巢恶性肿瘤占妇科恶性肿瘤的23%，死亡率为妇科恶性肿瘤之首。妇科恶性肿瘤的组织类型繁多，其中上皮癌在85%以上。早期诊断及合理治疗可改善预后及生存期，早期诊断治疗的五年存活率可达60%，而晚期只有10-30%。

目前用于检测肿瘤相关抗原CA125的免疫分析方法主要有酶联免疫分析法、化学发光免疫分析法等。酶联免疫分析法存在灵敏度低，线性范围窄、不易实现全自动化等方法学限制因素。化学发光免疫分析法是在酶联免疫分析法基础上发展起来的一种免疫检测技术，具有灵敏度高、检测线性范围宽、操作简便，自动化程度高等优势。目前化学发光免疫分析技术因其具有上述诸多优点得到了广泛的应用。

然而，在实际的免疫检测中，由于待测样品中所含的杂质成分较多，一定程度上影响了检测灵敏度和准确性，所以从复杂的样品基质中快速分离、纯化出目的待测物，是临床检验工作者面临的难题之一。

磁微粒免疫检测技术是利用高分子材料合成一定粒度大小的磁性固相微粒作载体，以物理吸附、化学偶联等方法包被上具有特异性亲和力的抗体或抗原等各种免疫活性物质，具有分离速度快、效率高、可重复性好、操作简单、不影响被分离细胞或其他生物材料的生物学性状和功能等特点，在外加磁场作用下可定向运动，使得某些特殊成分得以分离、浓集或纯化。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是克服现有技术的不足，提供一种肿瘤相关抗原CA125的纳米磁微粒化学发光测定试剂盒，其能够以较低的成本制备得到，且能够实现肿瘤相关抗原CA125准确和高精确地定量测定。

本发明同时还提供一种肿瘤相关抗原CA125的纳米磁微粒化学发光测定试剂盒的制备方法，该方法工艺稳定，成本低，且所得试剂盒的精密度高。

一种肿瘤相关抗原CA125的纳米磁微粒化学发光测定试剂盒，其特征在于，该试剂盒包括：

第一试剂：含荧光素标记的肿瘤相关抗原CA125抗体的溶液；

第二试剂：含碱性磷酸酶（ALP）标记的肿瘤相关抗原CA125抗体的溶液；

磁分离剂：含包被着荧光素抗体的磁微粒的悬浮液。

优选地，该碱性磷酸酶标记的肿瘤相关抗原CA125抗体由碱性磷酸酶与肿瘤相关抗原CA125抗体通过交联剂4-(N-马来酰亚胺基甲基)环己烷-1-羧酸琥珀酰亚胺酯（Succinimidyl 4-(N-Maleimidomethyl)Cyclohexane-1-Carbo，SMCC）和2-亚氨基硫烷盐酸盐（2-Iminothiolane HCl，2-IT）连接构成。

进一步地，所述磁微粒试剂中，包被有荧光素抗体的磁微粒由荧光素抗体与磁微粒通过偶联剂相化学偶联。

进一步地，所述第一试剂中的荧光素标记的肿瘤相关抗原CA125抗体的浓度为0.5~1μg/mL，所述第一试剂的pH为7-9；所述第二试剂中的碱性磷酸酶标记的肿瘤相关抗原CA125抗体的浓度为0.5~1μg/mL，所述第二试剂的pH为7-9。

本领域技术人员应知晓，本发明的试剂盒还可以进一步包括有其它检测所需的试剂，例如底物溶液。但是诸如底物溶液等其它试剂可以另行购买或配制，因此，虽然试剂盒中可以包括这些试剂，但它们对于本发明试剂盒来说并非必不可少。

本发明采取的又一技术方案是：一种上述的肿瘤相关抗原CA125的化学发光免疫分析试剂盒的制备方法，其包括分别制备所述第一试剂、所述第二试剂以及磁分离剂的步骤，其中：所述第二试剂的制备过程如下：

①将肿瘤相关抗原CA125抗体加入交联剂2-亚氨基硫烷盐酸盐溶液中室温静置后，再加入甘氨酸溶液，再次室温静置，收集活化后的肿瘤相关抗原CA125抗体，于2~8℃下保存备用；