[发明专利]一种氢氧化铝纳米胶佐剂的制备方法

说明书

技术领域

本发明属于动物生物制品免疫佐剂制备工艺技术领域，具体涉及一种氢氧化铝纳米胶佐剂的制备方法。

背景技术

佐剂最初是由 Gaston Ramon作为与特异性抗原联合应用的一种物质而进行叙述的，而与佐剂联合应用的特异性抗原此时所产生的免疫应答比其单独应用时要高得多。一般而言，佐剂本身并不提供免疫，只有在与免疫原组成一种制剂时，它们才能够改善由疫苗诱导产生的免疫应答的广度和效力。

目前临床上应用的疫苗用免疫佐剂多为白油佐剂、氢氧化铝佐剂、类脂佐剂和蜂胶佐剂等。白油佐剂免疫原性好，但是毒副作用大；氢氧化铝胶佐剂免疫原性好，副作用小，但不能诱导细胞免疫；类脂佐剂和蜂胶佐剂免疫原性好，可诱导体液免疫和细胞免疫，免疫持续时间长，但原材料价格昂贵。因此近年来，各国科研工作者应用不同原料和采用不同方法研制了一系列新型免疫佐剂，但均因为效果不理想或者毒力太大，没有一种得到得到广泛应用。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明提出了一种氢氧化铝纳米胶佐剂的制备方法，该方法制备出缓释作用更强的纳米级动物疫苗佐剂，所得的产物粒径分布均匀、纯度高，吸附力强，无副作用，应用效果好。

本发明的技术方案是通过如下步骤来实现的：

（1）配制明矾溶液：将固体明矾投入水中，通入蒸汽吹沸溶解，调节明矾溶液浓度至25%-28%，使明矾溶液温度保持在60～65℃之间；

配制纯碱溶液：通入蒸汽吹沸溶解碱液，调节浓度至10-12%，使纯碱溶液温度保持在50～55℃之间；

（2）化合：将调节好温度的矾碱溶液和碱液，用内径为20mm的胶管互相吻合，以相同流速通过冲击挡板流入不锈钢容器中内，边化合边用高速剪切机对混合溶液进行高速剪切，化合完毕后继续剪切30分钟，化合后溶液温度应在49±1℃，pH值为6-7；

（3）熟化：向剪切后的溶液中直接插入蒸汽管通入蒸汽，对溶液进行熟化，驱除CO₂，至没有大量气泡产生为止；

（4）冷却：向熟化胶液中加冷水使熟化胶液温降至75℃以下，搅拌均匀后测PH；

（5）分装：用水泵将熟化胶液送入六个帆布袋内，待熟化胶母液控干后，对剩余熟化胶进行洗涤；

（6）洗涤：母液控干后即可进行洗涤，洗涤水温控制在50～55℃，每次洗涤间隔2.5～3小时，洗涤时用搅棒打碎胶盐，搅拌均匀，将水放满胶袋，洗完六次，检查硫酸盐合格后，停止洗涤；

（7）收胶：把洗涤好的胶控干，用胶袋收起压在磅秤上，使胶脱水，至脱水后胶量位明矾投料量的2～2.5倍时进行收胶，胶经检验合格后即可使用。

其中上述步骤（3）中对溶液进行熟化至胶态变稀、发灰、青亮时停止通入蒸汽，吹沸后PH为7. 6～7.8。

其中上述步骤（4）中冷却后熟化胶液PH较熟化时胶液PH低或不变。

本发明所述技术方案的有益效果为：本发明在常规氢氧化铝胶佐剂的基础上，设计了一种缓释作用更强的纳米级动物疫苗佐剂制备方法，制备的氢氧化铝纳米胶佐剂与普通氢氧化铝胶佐剂配置的传染性灭活疫苗相比，提供吸附力更强，抗体水平结果显示纳米级氢氧化铝胶佐剂组明显好于普通氢氧化铝胶组，高出2～8个抗体滴度；用缓释作用更缓慢的纳米级佐剂生产疫苗，能提高灭活疫苗的质量，增强疫苗的免疫效力，延长兔疫持续期，较普通铝胶组长60天左右；另外用本制备方法所得的产物粒径分布均匀、纯度高，粒径主要集中于50～100nm左右，在免疫佐剂方面有较好的应用前景。

具体实施方式

为了使本发明的技术方案更加清楚明白，下面结合结合传染性鼻炎灭活疫苗实例对本发明作进一步说明。

一、疫苗制备

 1、制备抗原：

（1）菌液培养：将生产种子接种于半合成培养基封好瓶口并摇匀，置37℃温室中静止培养18小时左右，期间每个6～8小时摇晃一次。当眼观菌液呈现混浊的淡黄色时即达到生长高峰，准备收获，此时含菌量可以达到10亿/ml左右。

（2）制苗菌液的浓缩与灭活：用浓缩机将纯检合格的菌液进行浓缩，然后再用PH为7.2的生理盐水制成悬浮液，使40～50亿/ml菌体，通过比浊法测定最终的含菌量。再按体积比加入2‰的甲醛溶液进行灭活，混匀后于37℃灭菌1天，于2～8℃下放置1天，经检验无菌生长作为制苗抗原。

2、制备氢氧化铝胶

（1）配制明矾溶液：将固体明矾投入水中，通入蒸汽吹沸溶解，调节明矾溶液浓度至25%-28%，使明矾溶液温度保持在60～65℃之间；