[发明专利]黄柏药材双溶剂融合HPLC指纹图谱的建立方法及其标准指纹图谱

说明书

技术领域

本发明涉及中药材指纹图谱的构建方法，更具体的说是黄柏药材双溶剂融合指纹图谱的质量控制方法。属于药物分析技术领域。

背景技术

黄柏(PHELLODENDRI CHINENSIS CORTEX)为芸香科植物黄皮树Phellodendron chinense Schneid.的干燥树皮，习称“川黄柏”(国家药典委员会：中国药典，一部.北京，化学工业出版社，2010：153，286)，为常用中药，具有清热燥湿、泻火除蒸、解毒疗疮的功能，临床应用十分广泛。味苦、寒、归肾、膀胱、大肠经。功效清热燥湿、泻火解毒、退虚热。

《中国药典》2005和2010版将两者分开，以“川黄柏”作“黄柏”，“关黄柏”单列。目前市场上销售的主流商品是关黄柏(颜玉贞，余琼希.黄柏HPTLC色谱指纹图谱研究.中兽医学杂志，2008，增刊：304～307)。伪品：木蝴蝶Oroxylum indicum(Linn.)Bentham ex Kurz树皮，黄皮Clausena lansium(Lour.)Skeels树皮(赵静，马骥，庞其昌，等.黄柏饮片光谱成像指纹图谱的研究.中草药，2010，41)。

文献中有关黄柏鉴别及指纹图谱的报道较多，多集中在黄柏药材的鉴别，指纹图谱的研究。采用的方法有高效液相色谱法、高效薄层色谱法、非水毛细管电泳法等分析手段。例如：王瑾采用反相高效液相色谱法，盐酸-70％乙醇(1∶100)回流提取，甲醇-乙睛-0.1mol/L磷酸二氢钠(磷酸调节pH为3.0)-2g/L十二烷基硫酸钠-三乙胺(25∶25∶25∶25∶0.2，v/v)，进样10μL，柱温室温，230nm检测，对收集的22个川黄柏、关黄柏样品进行分析，获得化学数据；用聚类分析和逐步判别分析进行模式识别(王瑾，黄柏的质最评价研究.沈阳：沈阳药科大学硕士学位论文.2004)。

杜雪以1％醋酸一甲醇超声提取，以乙腈和0.3％磷酸三乙胺水溶液为流动相梯度洗脱，柱温25℃，流速0.8ml/min，305nm检测，建立了川黄柏药材HPLC指纹图谱(杜雪，川产道地药材黄柏HPLC指纹图谱质量标准研究.四川：西南交通大学硕士学位论文.2007)。

王龙虎等以乙醇浸泡-超声两步提取，流动相A：50mmol/L的磷酸二氢钾缓冲溶液(PH 3.5)，流动相B：(50mmol/L的磷酸二氢钾缓冲溶液，磷酸调pH 3.5)∶乙腈＝3∶7的混合溶液，梯度洗脱，流速1ml/min，280nm检测，对黄柏药材、关黄柏药材、盐川黄柏饮片HPLC指纹图谱初步研究(王龙虎，黄柏药材及中药饮片的HPLC指纹图谱初步研究，中华中医药学会第四届中药炮制学术会议论文集，2004)。

但是文献资料中对黄柏、关黄柏及其混淆品的鉴别的都较分散，且方法较复杂，尚没有一种方法可以直接简单地把黄柏药材的品种区分开来。

发明内容

本发明按照新药研发中药材指纹图谱研究的技术要求，对固定品种、药用部位、产地、采收期、产地加工方法的黄柏药材进行HPLC指纹图谱的研究。

因此，本发明在于提供一种黄柏药材HPLC指纹图谱的建立方法，以及由此方法所得到的黄柏药材标准指纹图谱。为实现此目的，本发明通过对黄柏药材双溶剂高效液相色谱指纹图谱的研究，提出了一种更好的黄柏药材质量控制方法，弥补了现有质量控制技术的不足，同时可以鉴别川黄柏、关黄柏及其混淆品，使黄柏药材的质量控制更加完善和科学。

因此本发明的第一个目的是提供一种黄柏药材双溶剂HPLC指纹图谱的建立方法，所述方法包括以下步骤：

(1)制备对照品溶液：精密配制盐酸小檗碱对照品溶液；

(2)制备供试品溶液：精密称取黄柏或关黄柏药材粉末，用两种不同溶剂进行提取，提取液用微孔滤膜过滤，即得供试品溶液；

(3)采用高效液相色谱法进行测定得到指纹图谱，其中色谱条件为：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填料；采用梯度洗脱；紫外检测波长：300nm检测；优选地应用Agilent EZChrom Elite软件将两种溶剂提取部位指纹图谱进行融合，建立黄柏药材双溶剂融合指纹图谱；

(4)评价相似度：供试品指纹图谱采用国家药典委员会出版的中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004A版进行评价。