[发明专利]一种分离、检测黄曲霉的培养基及方法

说明书

技术领域

本发明属于微生物分离技术领域，尤其涉及一种分离、检测黄曲霉的培养基及方法。

背景技术

黄曲霉毒素(Aflatoxin)主要由黄曲霉(Aspergillus flavus)产生的代谢产物，是迄今发现的污染农产品毒性最强的一类生物毒素。其中，毒性最强、危害最大的是B1毒素，其毒性为氰化钾的10倍、砒霜的68倍，被列入严管的特剧毒物质。黄曲霉毒素既有很强的急性毒性，导致肝脏坏死出血，使免疫系统受损，引起蛋白质营养不良症并导致儿童发育受阻；也有明显的慢性毒性，具有致癌、致畸、致突变作用，对人、家畜的健康威胁极大，因此受到世界范围的广泛关注。

据世界粮农组织估计，世界范围内有25％的农作物产品受真菌毒素的污染，其中主要就是黄曲霉毒素。在我国，农产品黄曲霉毒素污染已成为影响食品安全重要隐患之一。2006年，国家疾病预防控制中心营养与食品安全所对我国部分农产品(包括玉米、花生)中黄曲霉毒素污染情况调查发现，从江苏、上海、浙江等九省市采集市售玉米中黄曲霉毒素的检出率为70.27％，平均含量为36.51μg/kg，最高为1098.36μg/kg，并有14.86％的玉米样品中B1毒素含量超出国家食品法典限量标准。花生中黄曲霉毒素的检出率为24.24％，平均含量为80.27μg/kg，最高为437.09μg/kg，有3.03％的样品中黄曲霉毒素含量超出国家限量标准。

2009年，农业部饲料质量监督检验测试中心(成都)对全国采集的1013份饲料样品检测发现，99.51％的样品中检测出黄曲霉毒素，除山东省91份饲料的黄曲霉毒素B1检出率为94.51％，其余各省的检出率均达100％，被检测样品中有2.27％的样品黄曲霉毒素超标。2010年中山大学对310名男生尿液进行检测发现90名同学的尿液中黄曲霉毒素M1呈阳性。

2011年，蒙牛牛奶中黄曲霉毒素M1超标，其原因是奶牛在食用霉变的饲料后，原奶中黄曲霉毒素M1超标所致。可见，控制农产品黄曲霉毒素污染已经成为粮食安全和农产品质量安全中迫切需要解决的重大问题。

由于黄曲霉毒素污染所带来的巨大经济损失和健康危害，人们一直在努力探求黄曲霉毒素产生机理及防控方法。而研究材料黄曲霉菌株的获取成为各项研究工作开展的首要前提条件。由于从各类环境中收集的样品尤其是土壤中微生物数量多、种类杂，给黄曲霉的分离带来较大困难。因此建立一种省时省力、高效专一的从各类样品中筛选黄曲霉的方法，将会对黄曲霉毒素产生机理及防控的研究有很大帮助。

发明内容

本发明提供了一种分离、检测黄曲霉的培养基，能高效快速地从土壤或农产品中特异分离黄曲霉。

一种分离、检测黄曲霉的培养基，配方为：酵母提取物8～12g/L、蔗糖8～12g/L、NaCl 75～85g/L、琼脂25～35g/L、硫酸盐0.01～0.03g/L、氯硝胺0.01～0.03g/L、抗生素0.05～0.15g/L。

更优选的配方为：酵母提取物9～11g/L、蔗糖9～11g/L、NaCl 78～82g/L、琼脂28～32g/L、硫酸盐0.015～0.025g/L、氯硝胺0.015～0.025g/L、抗生素0.08～0.12g/L。

所述配方中，酵母提取物和蔗糖为微生物的生长提供必不可少的氮源和碳源。黄曲霉生命力强，生长速度快，酵母提取物和蔗糖已能满足其生长必需条件。但为了能从各种微生物环境复杂的样品中特异筛选黄曲霉，本发明在酵母提取物和蔗糖的基础上添加了一系列添加剂，使培养基具有选择性，有利于黄曲霉的筛选。所述添加剂为：氯化钠、抗生素、氯硝胺和硫酸盐。

筛选过程中，样品中细菌会影响黄曲霉的生长，而培养基中氯化钠和抗生素的存在可以有效抑制细菌的生长繁殖。

培养基的渗透压对细菌生长影响较大，当环境中渗透压大于胞内渗透压时，细菌就会因失水而停止生长或死亡。由于细菌与真菌细胞壁成分的差异，高浓度的氯化钠能抑制多种细菌的生长，而对真菌无影响或影响较小。

市售的抗生素种类多样，本发明选用链霉素。

同样地，为避免其他生长较快的真菌对黄曲霉分离产生干扰，本发明的培养基中添加了适量的氯硝胺，氯硝胺能抑制除黄曲霉外大多数真菌的生长。