[发明专利]一种长枝木霉菌株及其用途

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体来说涉及一长枝木霉菌株，同时还涉及其长枝木霉菌株在抑制烟草黑胫病菌和烟草赤星病菌方面的用途。

 

背景技术

烟草黑胫病是烟叶生产过程中最为重要的根茎病害，而烟草赤星病是烟叶生产过程重要的叶部病害，二者的防治对烟叶生产尤为重要。

目前，对烟草黑胫病菌和烟草赤星病菌的防治方法很多，有栽培抗病品种、化学防治、作物轮作和生物防治。种植抗病品种是防治两种病害是最为经济有效的方式，但采用抗病品种防治两种病害时，不但要考虑品种抗性水平与稳定性，还需要顾及产量、质量和品种对不同环境的适应能力，这增大了品种选育的难度；其次，以上两种病害常与其它病害混合发病，常导致抗病品种的抗性丧失，从而影响烟草的稳定生产。而化学防治虽可以达到快速防治两种病害的目的，但这种方法成本高，长期反复使用会导致农药残留而污染土壤环境并造成病原菌抗药性的提高，同时农药的施用还会杀死土壤中大量对植物生长有益的微生物，一旦病原菌入侵将造成严重后果。此外，烟草黑胫病侵染期长，化学防治难以长期奏效。而烟草赤星病属叶面病害，施用化学农药后会影响烟叶品质，从而阻碍了烟草的可持续发展。作物轮作是防治两种病害的另一个措施。在烟草生产过程中，采用作物轮作可以避免病原菌积累，在栽培范围内减少病原菌的数量，从而降低病菌对栽培烟草的危害。但采用作物轮作只能在一定程度上对两种病菌进行控制而无法彻底消除。

生物防治是利用拮抗菌与病原菌之间的相互拮抗作用，通过抑制病原菌的生长、孢子的萌发和病菌产生有毒的代谢产物，或是寄生于病原菌、与病原菌进行营养竞争等方式防治病害，因而具有无毒、无害、无残留等优点，对农业的可持续发展具有重要意义，也因此得到了世界各国研究者的广泛关注。但生防真菌在田间应用时，在高温、高湿下不易产孢。并且长枝木霉菌对以上两种病害的生物防治目前还没有相关报道。

 

发明内容

本发明的目的在于克服上述问题而提供的一种对不良环境的耐受力强，耐突变，容易培养和保存，抑制烟草黑胫病菌及烟草赤星病菌效果好的长枝木霉菌株。

本发明的另一目的在于提供该长枝木霉菌株在抑制烟草黑胫病菌和烟草赤星病菌方面的用途。

一种长枝木霉菌GF-10（Trichoderma longibrachiatum GF-10），其形态特征：在PDA上生长迅速，背面无色至黄绿色，在28℃培养72h小时可产生分生孢子，分生孢子梗次级分枝少，常直角伸出；瓶梗直接从次级分枝上伸出，单生，对生、极少轮生，葫芦状或烧瓶型，长5.3～11.6μm，宽2.0～3.2 μm，终极瓶梗圆锥状；孢子灰绿或绿色，卵圆形或椭圆形，长3.4～6.6 μm，宽2.3～3.5 μm。

该菌种已于2012 年9月26日保藏在中国典型培养物保藏中心（地址：中国 武汉 武汉大学），保藏号：CCTCC M 2012383，名称为：长枝木霉GF-10（Trichoderma longibrachiatum  GF-10）。

对烟草黑胫病菌、烟草赤星病菌有抑制作用的长枝木霉菌GF-10（Trichoderma longibrachiatum  GF-10）的分离步骤：

（1）拮抗菌的分离与纯化：准确称取采自中国贵州省毕节市黔西县10.0g烟株根系土样，借助无菌操作技术，将土样加入盛90mL无菌水并带有玻璃珠的三角瓶中，振荡10min，使土样均匀地分散为稀释液，再吸取1mL土壤稀释液到9mL无菌水中，充分混匀，成为土壤悬液。采用混菌法接种，吸取1mL悬液于直径为9cm的灭菌培养皿中，然后倾注已熔化并冷却到45℃的双抗马丁氏培养基，充分混匀，待凝固后倒置，28℃保温培养5天，挑取培养基中长出的肉眼可见的真菌菌落，移入PDA平板上，恒温培养，直至纯化得到单菌落，转移至斜面试管保存。

（2）拮抗菌的筛选

　 　先用打孔器（直径0.5cm）在已培养的病原菌菌落（烟草疫霉菌、链格孢菌）上分别打孔，用无菌牙签挑取菌饼分别置于PDA平板中央，使有菌丝的一侧接触培养基，倒置于28℃的恒温培养箱中培养5～7d，用于抗菌作用检测。采用平板对峙法，分别在接有烟草疫霉、链格孢病原菌的PDA平板上，用牙签取待测菌株的菌体，分别点种于距离病原菌约5cm处。使它们位于培养皿的正三角形的3个顶角位子上。倒置于28℃下培养观察，5～7天后观测，在烟草疫霉病原菌的PDA平板上和链格孢病原菌的PDA平板上都有一株真菌产生了很明显的抑菌作用，将此菌株编号为GF-10；