[发明专利]紫花苜蓿叶黄素循环组分的检测方法

权利要求书

1.紫花苜蓿叶黄素循环组分的检测方法，取紫花苜蓿鲜叶0.1g,倒入液氮研磨至粉末状，加入85%丙酮，匀浆2-3 min，再加入100%丙酮，匀浆1 min之后置于冰上15 min，1200g离心10 min，取上清液用0.45 μm微孔滤膜过滤后，取10μl进样到高效液相色谱仪采用浓度线性梯度洗脱，最后检测出紫花苜蓿叶黄素循环组分玉米黄质（Z）、环氧玉米黄质（A）和紫黄质（V）的含量。

2.根据权利要求1所述的紫花苜蓿叶黄素循环组分的检测方法，其特征在于所述高效液相色谱仪使用美国Agilent 1100高效液相色谱仪，色谱柱使用美国Agilent Hypersil ODS的4.0×250 mm，5 μm色谱柱。

3.根据权利要求1所述的紫花苜蓿叶黄素循环组分的检测方法，其特征在于所述浓度线性梯度洗脱，流动相A液为100%乙腈，B液为100%水，浓度线性梯度洗脱程序为90% A液 + 10% B液洗脱15min，接着在5min内，90% A液浓度线性递增至100%的A液，之后再洗脱20 min，流速1 ml/min，检测波长445 nm，柱子温度30℃，进样体积10 μl。

4.根据权利要求1所述的紫花苜蓿叶黄素循环组分的检测方法，其特征在于所述紫花苜蓿叶黄素循环组分玉米黄质0119、环氧玉米黄质0231和紫黄质0259标样购自瑞士carotenature原装，纯度分别为99.6%、95.7%和98.6%。

5.根据权利要求1所述的紫花苜蓿叶黄素循环组分的检测方法，其特征在于所述紫花苜蓿叶黄素提取过程在无光条件下进行。

6.根据权利要求1所述的紫花苜蓿叶黄素循环组分的检测方法，其特征在于所述试剂丙酮为分析纯，水为超纯水，乙腈为色谱纯。

7.如权利要求1所述的紫花苜蓿叶黄素循环组分的检测方法，其特征在于准确称量玉米黄质0.96 mg，环氧玉米黄质1.128 mg，紫黄质1.536 mg，用甲醇定容100 ml 容量瓶中，取上述储备液1 ml，分别稀释10倍、50倍、100倍和200倍，分别取10 μl稀释后的标样进样到美国Agilent 1100高效液相色谱仪中，用美国Agilent Hypersil ODS（4.0×250 mm，5 μm）色谱柱，流动相A液为100%乙腈，B液为100%水，梯度洗脱程序：90%A液+10%B液洗脱15 min，接着在5 min内，90%A液浓度线性递增至100%的A液，之后再洗脱20 min，流速1 ml/min，检测波长445 nm，柱子温度30℃，以它们的峰面积和浓度进行线性回归，建立标准曲线，玉米黄质、环氧玉米黄质和紫黄质的保留时间分别为15.38 min、10.20 min和6.90 min；在暗室中，取紫花苜蓿鲜叶0.1g放入研钵中，然后倒入液氮迅速研磨至粉末状，加入85%丙酮，匀浆2-3 min，再加入100%丙酮，匀浆1 min，之后将研钵置于冰上15 min，1200 g离心10 min，取上清液用0.45 μm微孔滤膜过滤后，取10 μl体积进样到美国Agilent 1100高效液相色谱仪中，用美国Agilent Hypersil ODS的4.0×250 mm，5 μm色谱柱，流动相A液为100%乙腈，B液为100%水，梯度洗脱程序：90%A液+10%B液洗脱15 min，接着在5 min内，90%A液浓度线性递增至100%的A液，之后再洗脱20 min，流速1 ml/min，检测波长445 nm，柱子温度30℃，紫花苜蓿玉米黄质、环氧玉米黄质和紫黄质的保留时间分别与标样的保留时间一致，最后测出玉米黄质、环氧玉米黄质、紫黄质的含量。