[发明专利]一种环带小薄孔菌及其对甲霜灵农药残留的降解菌剂

说明书

技术领域

本发明属于环境微生物领域，是利用微生物的方法降解保护地菜田土壤中的化学农药残留，涉及一株分离自原始森林腐木上的对卵菌杀菌剂——甲霜灵有高效降解效果的环带小薄孔菌菌株（Antrodiella zonata）。 

技术背景

随着农药大量生产和广泛使用，在其带给人们巨大农业收益的同时，也造成了环境的严重污染，化学农药对人类健康的严重威胁也日益受到人们的重视。施用于作物上的农药，其中一部分附着于作物上，一部分散落在土壤、大气和水等环境中，环境残存的农药中的一部分又会被植物吸收。残留农药直接通过植物果实或水、大气到达人、畜体内，或通过环境、食物链最终传递给人、畜，造成对人体的长期危害。为了适应市场对反季节蔬菜水果的大量需求，保护地（大棚和温室）面积逐年增加。由于连年种植蔬菜和水果，高频率使用保护地土壤造成了土壤肥力下降，密闭空间内各类植物病原菌大量滋生，为了抑制这些病原菌必须使用更高浓度各类杀菌剂，这样就造成土壤中化学农药残留的持续积累。因此探索对农药残留进行有效降解的方法成为急待解决的问题。在该领域研究中，近年来广泛兴起的使用微生物对农药残留进行生物降解成为热点领域，通过微生物作用将农药大分子分解成小分子化合物，使其丧失对人体的危害，而且不会对环境造成二次污染，因此微生物对降解农药残留具有巨大潜力。白腐真菌是一类能够生长在木材基质上，造成木材白色腐朽的一类真菌，除了能够降解木材中的木质素、纤维素和半纤维素外，还能够有效降解多种环境污染物，包括目前很多种类的人工合成化学农药，其生长过程中分泌的漆酶、锰过氧化物酶和木质素过氧化物酶等酶系能够非专一性降解这些环境污染物。白腐真菌种类繁多，其对环境污染物的降解能力也千差万别，因此获得对化学农药的高效降解菌株并运用特定的施用方式降解土壤中的农药残留污染，对有效修复保护地菜田农药污染土壤，降低农药残留对人体毒害、保护生态环境具有重要意义。 

本专利是从原始森林的腐木上分离得到的一株高效降解卵菌杀菌剂——甲霜 灵的白腐真菌菌株Antrodiella zonata，实验表明该菌能够在水琼脂培养基中利用甲霜灵及其他几种卵菌杀菌剂农药作为唯一碳源和能源而生长，并使其降解；在使用以稻草秸秆为培养基进行固态发酵后，将培养物添加至残留有甲霜灵，该菌18天能够将土壤中的甲霜灵降解75%以上，具有较好的降解效果。充分说明该菌可以用于保护地菜田土壤甲霜灵农药残留的生物降解。目前尚无利用环带小薄孔菌降解甲霜灵农药残留研究的文献报道。 

发明内容

本发明的目的是提供一种分离自腐木的能够高效降解卵菌杀菌剂——甲霜灵的环带小薄孔菌菌株，利用该菌株对保护地菜田土壤中的甲霜灵农药残留进行降解的方法。 

一株甲霜灵农药降解菌，该微生物是一种白色腐朽真菌，经鉴定为环带小薄孔菌（Antrodiella zonata），该环带小薄孔菌菌株保存于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（简称CGMCC，地址：北京市朝阳区大屯路，中国科学院微生物研究所），保藏日期：2012年11月15日保藏编号为：CGMCC 6810。 

菌落为棉絮状，乳白色；菌落由生殖菌丝组成，生殖菌丝薄壁到稍厚壁，直径通常为1.8-3微米，偶有膨胀至6微米，锁状联合分隔，多见双侧锁状联合，常分枝，菌丝内容物在棉兰试剂中无有嗜蓝反应，在碘化钾试剂中无变化；平皿培养3天菌落直径3-4厘米； 

能够腐生于多种阔叶树倒木上，分解并利用木材中的木质素、纤维素和半纤维素，并能以甲霜灵农药为唯一营养源进行生长。该菌株的ITS序列的GenBank（登录号为KC218571）。 

所述的甲霜灵农药残留降解菌生产的菌剂，生产步骤为： 

（1）菌种活化：挑取所述环带小薄孔菌菌株接种于加有分离保藏培养基的60mm培养皿中，于28-30℃下培养4-5天； 

（2）将上述培养好的菌种打成6mm的菌丝小片，接种入500ml锥形瓶液体培养基中，于28-30℃、140-160rmp/min转速下震荡培养4-5天； 

（3）将上述步骤培养好的发酵液连同菌丝球，用内切式匀浆机于5000rmp/min进行匀浆3次，每次匀浆时间15-20秒； 

（4）将稻草切段，段长5mm左右，加入蒸馏水使稻草段含水量50-60%（W/W），然后经121℃高温灭菌20-30分钟；