[发明专利]龙芽草的组织培养与快速繁殖方法

说明书

技术领域

本发明涉及植物组织培养与快速繁殖方法，尤其涉及一种龙芽草的组织培养与快速繁殖方法。

背景技术

龙芽草(Agrimonia pilosa)为蔷薇科(Rosaceae)龙芽草属多年生草本植物，是一种重要的药用植物，其地上部分、带短小根茎的冬芽和根均可入药。其中，地上部分入药称仙鹤草，异名脱力草、狼牙草、金顶龙牙、龙牙草、龙芽草、黄龙尾、刀口药、毛脚茵等，性平，味苦、涩，归肺、肝、脾经，具收敛止血、消炎止痢、杀虫和抗肿瘤之功效，临床用于治疗嗜盐菌感染性食物中毒、滴虫性阴道炎和梅尼埃综合症得到良效；带短小根茎的冬芽入药称鹤草芽，异名狼牙、狼齿、狼牙子、狼牙草根芽、仙鹤草根芽等，其性凉，味苦、涩，具驱虫和解毒消肿之功效，主治绦虫病、阴道滴虫病、疮疡疥癣、疖肿和赤白痢疾。临床治疗绦虫病有良效；根入药名龙芽草根，异名地冻风，其性温，味辛、涩，具解毒和驱虫之功效，主治赤白痢疾、疮疡、肿毒、疟疾、绦虫病和闭经等症。近些年来，对龙芽草的化学成分分析、提取分离、测定方法和功效都有了较深入的研究。目前龙芽的繁殖采用种子和分根方式进行，这两种方法存在淹繁殖系数低、繁殖周期长的缺点，因此建立龙芽草的组培快繁体系，是实现其产业化生产的又一有效途径。

已有龙芽草组织培养的报道（《植物生理学通讯》1986年04期 ，龙芽草的组织培养，吴美芬、陈伟东）：以龙芽草实生苗的下胚轴、子叶和叶片为外植体的器官发生途径，叶片和下胚轴需经2,4-D诱导愈伤组织阶段，子叶可经MS+6-BA 2.0 mg/L NAA 0.2 mg/L诱导愈伤组织后分化出不定芽。

发明内容

为了解决上述的技术问题，本发明的目的是提供一种龙芽草的组织培养与快速繁殖方法， 采用该方法进行龙芽草的组织培养与快速繁殖，提高了生根率和生根数，并且根的长度和粗度适中，大大提高了移栽的成活率。

为了实现上述的目的，本发明采用了以下的技术方案：

龙芽草的组织培养与快速繁殖方法，该方法包括以下的步骤：

1）外植体的消毒：

取刚发育成熟的龙芽草羽状复叶中的较大小叶，加洗涤剂仔细刷洗，再用流水冲洗，在超净台里将叶片转入酒精溶液中浸泡，后转入消毒液中浸泡消毒，用无菌水冲洗，然后将叶片切成1~3 cm²的小块，以正面朝上的水平摆放方式接种到添加不同植物生长调节物质的MS培养基上；

2）不定芽诱导

外植体接入的MS培养基中添加的植物生长调节物质的组成包括：

6-BA  0.5~5.0 mg/L

TDZ   0.1~1.0 mg/L；

先进行暗培养，温度为25±1℃，培养条件为光/暗小时比为12~16:8~12，光照强度30~40 μmol/ｍ·s； 

3）切取叶片嫩绿、生长旺盛且2~3 cm高的不定芽，插入到生根培养基中，所述的生根培养基中包括：

基本培养基  （1/4~1）MS 

NAA          0.05~0.5 mg/L；

炼苗时微开培养瓶盖进行炼苗，20~30h后取出并洗净根部附着的培养基，移入土中，初期要做好保湿措施，并置于阴凉处，待新叶长出，即可除去烧杯。

作为优选，上述的步骤1）消毒液为滴加一滴1 mol/L NaOH的0.2%HgCl₂溶液。作为再优选，上述的消毒时间为10~11 min。

作为优选，上述的步骤2）中添加的植物生长调节物质的组成包括：

6-BA  1.0~4.0 mg/L

TDZ   0.1~0.8mg/L。

作为最优选，上述的步骤2）中添加的植物生长调节物质选用TDZ 0.3 mg/L +6-BA 2.0 mg/L。

作为优选，上述的步骤2）植物生长调节物质的组成还包括IAA、NAA或两者的组合，IAA的浓度为0~2.0 mg/L，NAA的浓度为0~0.5 mg/L。

作为再优选，上述的步骤2）植物生长调节物质的组成还包括IAA，IAA的浓度为0.5~1.5 mg/L。

作为优选，上述的步骤3）生根培养基中NAA为 0.08~0.3mg/L。

作为最优选，上述的步骤3）生根培养基为1/4MS+NAA 0.1 mg/L。