[发明专利]一种检测细胞内硫化氢的荧光探针及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种检测细胞内硫化氢的荧光探针，其结构式如下：

2.权利要求1所述的检测细胞内硫化氢的荧光探针的制备方法，其特征是，包括步骤如下：

（1）将Cy7荧光染料、乙酸钠溶解在无水DMF中，在Ar气保护下加热回流2-4h，得到的混合物冷却后抽滤，母液在-4～20℃低温结晶，抽滤得酮式花菁红棕色晶体；

（2）将邻甲酰基苯甲酸、草酰氯溶解在无水CH₂Cl₂中然后加入少量DMF，在0℃搅拌2-6h，得邻甲酰基苯甲酰氯；

（3）将酮式花菁、三乙胺溶于无水CH₂Cl₂，冷却至0℃，逐滴加入邻甲酰基苯甲酰氯并在0℃下搅拌10-30min，混合物加热至室温，搅拌过夜，抽滤，旋干，用色谱柱进行分离，旋干得绿色固体。

3.根据权利要求1所述的检测细胞内硫化氢的荧光探针的制备方法，其特征是，步骤（1）中所述的Cy7荧光染料、乙酸钠的质量比为2.3：1；无水DMF用量为每克乙酸钠用200-300毫升。

4.根据权利要求1所述的检测细胞内硫化氢的荧光探针的制备方法，其特征是，步骤（2）中邻甲酰基苯甲酸、草酰氯、无水CH₂Cl₂、DMF的用量比例为1.2~3.0：1.0~3.0：20~30：2~6，g：g：mL：μL。

5.根据权利要求1所述的检测细胞内硫化氢的荧光探针的制备方法，其特征是，步骤（3）中酮式花菁、三乙胺、无水CH₂Cl₂、邻甲酰基苯甲酰氯的用量比例为1.2~3.0：3~6：20~30：3~6，g：g：mL：g。

6.根据权利要求1所述的检测细胞内硫化氢的荧光探针的制备方法，其特征是，步骤（3）所述的色谱柱分离洗脱剂为V_乙酸乙酯：V_甲醇=2:1。

7.权利要求1所述的荧光探针在检测细胞内硫化氢中的应用。

8.权利要求7所述的应用方法，其特征是，用于活细胞内硫化氢检测：

（1）将含有荧光探针分子的缓冲溶液5-10μM加入培养好的细胞放于培养箱中孵育8-12分钟；

（2）将细胞用生理PBS缓冲液洗去多余的探针，然后进行激光共聚焦显微成像，如果是检测内源性的物质，则是直接进行共聚焦成像，如果是外加检测物的，则是加了检测物后，再次孵育12-16分钟，进行成像。