[发明专利]具有氧化还原/pH双重刺激响应性的纳米水凝胶及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，具体涉及一种纳米水凝胶及其制备方法和应用，进一步涉及具有氧化还原/pH双重刺激响应性的纳米水凝胶及其制备方法，以及该纳米水凝胶作为药物载体的应用。

背景技术

根据大量研究表明，阿霉素是一种有效的抗癌药物,但是直接注射后通过体液循环到达肿瘤组织的剂量很低，而且会给人体带来严重的副反应。世界上已经有很多研究来发展目标靶向药物传输体系（drug delivery systems, dds）来增强药效和降低副反应，这些药物载体包括各种形态的胶束、纳米粒子、微胶囊、纳米水凝胶等。

在各种药物载体中，聚合物纳米水凝胶是一种理想的药物载体。作为一种通过物理或者化学交联的三维高亲水性的聚合物网络，水凝胶是最接近于人体各种组织细胞的形态，从某种意义上说，人体各种组织都是不同水含量的凝胶。其中，化学交联的纳米水凝胶的高度亲水性和胶体稳定性使得它是一种理想的药物传输载体。

对于目标药物载体，智能型的纳米水凝胶尤其重要，因为它可以选择性的在目标区域释放药物，而在别的区域保持稳定，一般体现为对于pH值、温度、离子浓度、氧化还原价势或者它们之间的组合的刺激响应性。其中，最重要的是pH和氧化还原的刺激响应性，因为肿瘤组织（pH弱酸性）和正常细胞（pH 中性）间，以及细胞外液（pH 中性）和细胞内的内涵体和溶酶体（pH酸性）之间存在着明显的差异，而由不同比例的还原型/氧化型谷胱甘肽产生的细胞外液的氧化环境和细胞内液的还原环境氛围则使得氧化还原刺激响应性也非常重要。针对这些不同组织部位的不同氧化还原/pH设计多重刺激敏感性的药物载体，可以智能化的控制释药和对于肿瘤细胞具有靶向杀伤性。

对于肿瘤组织，一般为了增强药效，保持药物在目标组织增强渗透滞留效应 (EPR，Enhanced enhanced permeability and retention effect)，需要药物载体为稳定的高分子量聚合物；但是同时为了在释药结束后可以顺利通过肾脏代谢排出体外，减小药物载体对人体的副作用，一般又要求聚合物分子量小于初次代谢阈值（45－50 kDa）,为了同时满足这两个矛盾的需求，制备生物可降解的药物载体显得尤为重要。

据大量研究表明，叶酸受体是一种在多种癌细胞中广泛存在，并且和叶酸分子发生相互特殊作用的物质。利用叶酸和叶酸受体特有的相互作用，人们通常将叶酸作为特殊的靶向分子来修饰各种纳米抗癌药物载体，起到对于癌细胞的靶向识别作用，从而提高药物的传递效率，降低药物的副作用。

基于以上信息，设计制备一种具有化学交联的、良好的胶体稳定性的、具有氧化还原/pH双重刺激响应性的、可生物降解的叶酸靶向型的纳米水凝胶药物载体将会是对于药物传递领域的一次很好探索。

发明内容

本发明的目的在于提供一种具有化学交联的、良好的胶体稳定性的、具有氧化还原/pH双重刺激响应性的、可生物降解的叶酸靶向型的纳米水凝胶及其制备方法。

本发明另一目的在于提供所述的纳米水凝胶作为药物载体的应用。

本发明提供的具有氧化还原/pH双重刺激响应性的纳米水凝胶的制备方法，具体步骤为：

第一步：在溶剂中加入聚合单体和交联剂，反应温度为60－120^oC，蒸馏沉淀除去一半溶剂，反应时间为0.5－2 h；离心除去溶剂和未反应单体，用乙醇和去离子水反复洗涤3－5次，真空烘箱内干燥（例如45^oC干燥24 h）,即得到聚合物凝胶粒子；

第二步：将第一步得到的凝胶粒子，加入一定量和一定比例的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐（EDC）/ N-羟基丁二酰亚胺（NHS），先在溶剂中进行活化反应，再和氨基化的叶酸分子反应，即得到具有氧化还原/pH双重刺激响应性的纳米水凝胶。

本发明中，所述溶剂为单一溶剂或混合容剂，其中，单一溶剂为乙醇、乙腈、水、四氢呋喃、甲基异丁基酮或甲苯，混合溶剂为不同重量比例的乙腈与乙醇、乙腈与四氢呋喃、乙腈与水、乙醇与甲苯、或甲基异丁基酮与乙腈的混合物 ；所述聚合单体为甲基丙烯酸（MAA）、丙烯酸（AA）、聚乙二醇（Mn=300，475，526，600，800，900，1000，1500，2000）, N-2-羟丙基一甲基丙烯酰胺（HPMA）等；所述交联剂为N,N'-双(丙烯酰)胱胺（BACy）。