[发明专利]一种天蚕素抗菌肽生产工艺

说明书

技术领域

本发明涉及一种天蚕素抗菌肽生产工艺。

背景技术

天蚕素（cecropins）是第一个被发现的动物抗菌肽，1980年，由Boman等从天蚕蛹中分离得到。该类多肽抗生素一般含有37～39个氨基酸残基，不含半胱氨酸，其N端区域具有强碱性，可形成近乎完美的双亲螺旋结构，而在C端区域可形成疏水螺旋，两者之间有甘氨酸和脯氨酸形成的铰链区，多数多肽的C端被酰胺化，酰胺化对其抗菌活性具有重要作用。

此后，人们相继从家蚕、柞蚕、果蝇、麻蝇中分离到了cecropins类抗菌肽。1989年，Lee等人从猪小肠中分高到了cecropin P1，说明了cecropins可能在动物中广泛存在。天蚕素（cecropins）对革兰氏阳性菌、部分革兰氏阴性菌具有很强的杀伤力，而对真菌和真核细胞没有毒性。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种天蚕素抗菌肽生产工艺。

本发明的技术方案是：一种天蚕素抗菌肽生产工艺，它的步骤如下：

（1）携带天蚕素抗菌肽的枯草芽孢杆菌基因工程菌复壮：从-70℃冰箱取出冻干粉保存的携带天蚕素抗菌肽的枯草芽孢杆菌种，以斜面培养方式复活菌种，接种于斜面培养基上，在斜面生长条件下生长；

（2）种子培养与扩大：将斜面上活化好的菌种接种于250 ml的锥形瓶上，装30 ml摇瓶培养基，摇瓶培养条件下培养；

（3）枯草芽孢杆菌的发酵：从种子培养到最后30M³发酵罐发酵培养需要3级种子扩大，一级种子扩大：将摇瓶培养好的种子按1：100分别扩大于3个500 ml的锥形瓶，装50 ml种子培养基，种子培养条件下培养；二级种子扩大：将一级种子扩大的种子按1：100比例扩大于30 L种子发酵罐，装15 L种子培养基，种子培养条件下培养；三级种子扩大：将二级扩大的种子按1：100扩大于3 M³种子发酵罐，装1.5 M³种子培养基，种子培养条件下培养，将二级种子扩大培养好的种子按1：20接种于30M³发酵罐，装21M³发酵培养基，发酵培养条件下培养。

本发明的有益效果是：本发明工艺简单，使生产天蚕素抗菌肤的工艺流程缩短，简便，节约耗料量40%以上，大大降低了原材料的消耗，节约了成本。

具体实施方式

一种天蚕素抗菌肽生产工艺，它的步骤如下：

（1）携带天蚕素抗菌肽的枯草芽孢杆菌基因工程菌复壮：从-70℃冰箱取出冻干粉保存的携带天蚕素抗菌肽的枯草芽孢杆菌种，以斜面培养方式复活菌种，接种于斜面培养基上，在斜面生长条件下生长；

（2）种子培养与扩大：将斜面上活化好的菌种接种于250 ml的锥形瓶上，装30 ml摇瓶培养基，摇瓶培养条件下培养；

（3）枯草芽孢杆菌的发酵：从种子培养到最后30M³发酵罐发酵培养需要3级种子扩大，一级种子扩大：将摇瓶培养好的种子按1：100分别扩大于3个500 ml的锥形瓶，装50 ml种子培养基，种子培养条件下培养；二级种子扩大：将一级种子扩大的种子按1：100比例扩大于30 L种子发酵罐，装15 L种子培养基，种子培养条件下培养；三级种子扩大：将二级扩大的种子按1：100扩大于3 M³种子发酵罐，装1.5 M³种子培养基，种子培养条件下培养，将二级种子扩大培养好的种子按1：20接种于30M³发酵罐，装21M³发酵培养基，发酵培养条件下培养。