[发明专利]间充质干细胞与肿瘤细胞的共培养体系建立及肿瘤微环境中间充质干细胞遗传稳定性变化特征

权利要求书

1.间充质干细胞与肿瘤细胞的共培养体系，其特征在于，是采用具有PET膜的Transwell悬挂式培养小室结合6孔板进行非接触共培养，取对数生长期的细胞用0.25﹪胰蛋白酶消化制成单细胞悬液，计数、调整细胞密度后接种，其中，3天：间充质干细胞5×10⁴ /孔，A549 1×10⁵ /孔；7天：间充质干细胞2×10⁴ /孔，A549 4×10⁴ /孔。

2.根据权利要求1所述的间充质干细胞与肿瘤细胞的共培养体系，其特征在于，所述间充质干细胞为骨髓间充质干细胞；所述肿瘤细胞为人体肺腺癌上皮细胞系A549细胞。

3.间充质干细胞与肿瘤细胞的共培养体系的建立方法，其特征在于，是将人体肺腺癌上皮细胞系A549细胞接种于Transwell悬挂式培养小室的下室，将Transwell悬挂式培养小室的上室置于孔中，在Transwell悬挂式培养小室内接种间充质干细胞，然后将Transwell悬挂式培养小室的上下室的培养液相互通融，得到间充质干细胞与肿瘤细胞的共培养体系。

4.根据权利要求3所述的间充质干细胞与肿瘤细胞的共培养体系的建立方法，其特征在于，所述共培养体系的培养时间为3天、7天，37℃、饱和湿度、5%CO₂孵箱培养。

5.间充质干细胞与肿瘤细胞的共培养体系在研究肿瘤微环境中间充质干细胞生物学性状变化研究能干的应用以及筛选可提高肿瘤微环境中间充质干细胞遗传稳定性中的应用。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述肿瘤微环境中间充质干细胞可发生遗传稳定性变化，提示肺腺癌微环境引起间充质干细胞细胞增殖能力、迁移能力及遗传稳定性发生了变化，出现向类肿瘤细胞方向转化。

7.如权利要求5所述的应用，其特征在于，所述肿瘤细胞微环境的间充质干细胞发生形态学改变，胞核大而深染，可见病理性核分裂象，与原间充质干细胞存在明显差异；染色体核型分析显示，肿瘤细胞微环境的间充质干细胞染色体数目为亚三倍体、三倍体，有明显的染色体异常。

8.如权利要求5所述的应用，其特征在于，所述肿瘤细胞微环境的间充质干细胞，其细胞克隆形成率明显增多，细胞迁移能力明显改变；激光共聚焦结果显示，间充质干细胞细胞微丝呈束状或放射状聚集在细胞的突起和胞质内；共培养组细胞微丝走行不规则，与A549细胞相似，镜下可见丝足，Western blot结果显示，肿瘤细胞微环境的MSC p53、p62、Bcl-2、Bax、capase-3、HDAC4、MMP-2、MMP-9 HDAC4表达量较原MSC高表达。