[发明专利]甲基阿魏酸在制备预防和治疗肝纤维化药物中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及医药技术领域，具体地说是甲基阿魏酸在制备预防和治疗肝纤维化药物中的应用。

背景技术

肝纤维化(hepatic fibrosis，HF)是指肝组织内细胞外基质过度增生与异常沉积所致肝脏结构和功能发生异常改变的一种病理变化。几乎所有的慢性肝病，包括慢性乙型（丙型）病毒性肝炎、慢性酒精性与自身免疫性肝病等均经历这一病理过程，并随着肝纤维化的进一步发展，形成肝硬化，严重危害人类健康，寻找有效的预防与治疗肝纤维化的药物意义重大。

蝉翼藤(Securidaca inappendiculata Hassk)为远志科远志族蝉翼藤属攀援灌木，是广西民族特色中草药，广西民间称五味藤、丢了棒、一摩消等。其根茎味辛、甘、苦, 性微寒，有祛风湿、清热利尿、活血化瘀、消肿止痛的功效。现有报道表明，蝉翼藤具有较强的抗菌消炎、抗癌、抗病毒、抗HIV、免疫增强等多种活性，但至今未见到用从蝉翼藤中提取得到的甲基阿魏酸治疗肝纤维化疾病的相关报道。

发明内容

本发明的目的是提供甲基阿魏酸的新用途，即在制药中的应用。

本发明的技术方案是：一种甲基阿魏酸的新用途，它是用于治疗肝纤维化，即是将从蝉翼藤中提取出的甲基阿魏酸制成片剂、胶囊、颗粒或注射剂等剂型以治疗肝纤维化，其剂量为50-200mg/kg甲基阿魏酸/日，可分成2-3次服用。

本发明所述甲基阿魏酸是从蝉翼藤茎皮提取得到的有机酸类化合物，其提取工艺为：将蝉翼藤茎皮粉碎,95%乙醇回流提取3次→浸膏用100～200目硅胶拌样→以氯仿回流洗脱→洗脱液减压浓缩→中压硅胶色谱三氯甲烷:乙醚（1∶5）梯度洗脱→收集洗脱液，挥去溶剂得白色粉末结晶→再经重结晶和Sephadex LH220 凝胶柱色谱纯化(甲醇洗脱) →得到白色针状结晶。经结构鉴定为甲基阿魏酸，化学名为3,4-二甲氧基-苯丙烯酸，分子结构式如下：

经体外细胞模型实验和在体的急、慢性动物模型实验表明甲基阿魏酸具有预防与治疗肝纤维化作用，体外细胞模型证实甲基阿魏酸对大鼠贮脂细胞株HSC-T6细胞增殖及胶原合成具有明显抑制作用；动物试验表明甲基阿魏酸对小鼠四氯化碳(CCL₄)和D-氨基半乳糖( D-Gal)造成的急牲肝损伤具有保护作用，可以预防肝纤维化的发生；以CCL₄所致的化学性肝纤维化大鼠模型和牛血清白蛋白所致的免疫性肝纤维化大鼠模型证实甲基阿魏酸对慢性肝纤维化具有较好的治疗作用。

以上细胞与动物实验结果表明：甲基阿魏酸具有确切的抗肝纤维化作用，可单方或复方用于制备预防和治疗肝纤维化的药物。

具体实施方式

以下通过实施例对本发明作进一步的阐述：

实施例1  甲基阿魏酸对大鼠贮脂细胞株HSC-T6细胞的增殖和胶原合成的抑制作用的试验：

将HSC-T6细胞用10%胎牛血清的DMEM培养基培养。取对数生长期细胞，调整细胞浓度为1×10⁵/ml，每孔100μl，接种于96孔细胞培养板。37℃下置5%CO₂培养箱中培养24小时，去培养基，以含不同浓度药物（甲基阿魏酸终浓度为2.5μg/ml、5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml、40μg/ml)的培养基孵育24小时，同时设立空白对照组，每一样品设5个复孔，然后每孔加入MTT(5mg/ml)20ul继续孵育4h，将培养基倒尽，吸干，每孔加入二甲亚砜200ul，混匀后置自动酶标仪（检测波长490nm）读取各孔光密度值，记录结果，并计算抑制率，结果见表1。按同样方法将生长良好的HSC细胞株接种于96孔培养板上，培养至细胞生长融合以消除细胞生长对胶原合成的影响后，通过³H-脯氨酸掺入法用液体闪烁计数仪测定样品放射性强度，计算甲基阿魏酸对HSC-T6细胞胶原合成的抑制率，结果见表1。

表1．甲基阿魏酸对HSC-T6细胞增殖和胶原合成抑制率