[发明专利]一种天麻中总DNA的提取方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种中药DNA的提取方法，更具体地说，本发明涉及一种天麻中总DNA的提取方法，属于中药DNA提取分离技术领域。

背景技术

天麻为兰科植物天麻Gastrodia elata Bl.的干燥块茎。又名赤箭、离母、鬼督邮、神草、独摇芝、赤箭脂、定风草、合离草、独摇、自动草、水洋芋。立冬后至次年清明前采挖（以冬麻为好），是著名的中药材。早在二千多年前就已入药，以云南昭通产者为优。富含天麻素，香荚兰素，蛋白质，氨基酸，微量元素。其性辛、温、无毒，有抗癫痫，抗悸厥，抗风湿；镇静，镇痉，镇痛，补虚，平肝息风的功效。功能主治平肝息风止痉。用于头痛眩晕，肢体麻木，癫痫抽搐，破伤风。头昏眼花，神经衰弱，风寒湿痹，小儿惊风等症。临床应用证明，对血管性神经性头痛、脑震荡后遗症等有显著疗效。

天麻是名贵药材，以块茎入药，其DNA不容易提取，为了进行天麻分子生物学分析，从天麻中快速提取总DNA是一个急需解决的问题。

国家知识产权局于1999.5.26公开了一件申请号为98120239.X，名称为“一种从天麻中提取的抗真菌蛋白及其制备方法”的发明专利，该专利利用生物技术的方法，主要是液相色谱技术及蛋白质结构分析技术，天麻中分离纯化出一种抗真菌的蛋白质名为GAFP-1，其分子量为10kD，等电点为8.45。从氨基酸组成上看，它富含天门冬氨酸(酰胺)Asx(22.1%)、甘氨酸Gly(10.0%)、亮氨酸Leu(9.4%)，只含一个Met，不含Pro。GAFP-1的N端氨基酸序列为SDRLNSGHQLDTGGSLAQGGYLFI。根据这个序列可以合成DNA探针或引物，可克隆出GAFP-1基因，为获得转基因抗真菌农作物打下了物质基础。

现有技术以及上述专利中的技术方案都不能快速高效的提取天麻中的总DNA，其提取的总DNA纯度较低，且总DNA提取物非常不稳定。

发明内容

本发明旨在解决上述现有技术中提取的总DNA纯度低，且提取出来的总DNA非常不稳定的问题，提供一种天麻中总DNA的提取方法，能够快速、高效的提取天麻中的总DNA。

为了实现上述发明目的，其具体的技术方案如下：

一种天麻中总DNA的提取方法，其特征在于：包括以下工艺步骤：

A、预处理

将天麻干燥，然后粉碎成天麻粉末，再研磨成微末；

B、CTAB提取

向步骤A得到的天麻微末中加入60-70℃的十六烷基三甲基溴化铵缓冲液，在65-85℃的水浴中加热25-45分钟，加入四氢呋喃和丙酮，离心分离，取上清液备用；

C、SDS提取

向步骤B得到的上清液中加入65-70℃的十二烷基硫酸钠缓冲液，混合均匀后保温放置20-35分钟，在2-5℃下离心分离，取上清液，加入氯仿和异丙醇，再在常温下进行一次离心分离，置于-10-1℃下40-50分钟，去除上清液，将其沉淀用乙醇洗2-5次，再加入RNA水解酶，在35-46℃下保温1-2小时得到天麻总DNA提取物。

优选的，本发明在步骤A中，所述的将天麻粉碎为粉碎成20-50目。

优选的，本发明在步骤A中，所述的研磨成微末是采用石英砂进行研磨。

优选的，本发明在步骤B中，所述的十六烷基三甲基溴化铵缓冲液的加入量为天麻与十六烷基三甲基溴化铵缓冲液的重量体积比为1:2-3.5（g/ml）。

优选的，本发明在步骤B中，所述的四氢呋喃和丙酮的加入量的总和与所述的十六烷基三甲基溴化铵缓冲液加入量相等。

更进一步的，所述的四氢呋喃和丙酮加入量之比为12-20:1。

优选的，本发明在步骤B和步骤C中，所述的离心分离具体为在500-1000转/分钟的转速下离心分离10-25分钟。

优选的，本发明在步骤C中，所述的十二烷基硫酸钠缓冲液的加入量为天麻与十二烷基硫酸钠缓冲液的重量体积比为1:8-16（g/ml）。

更进一步的，所述的氯仿和异丙醇的加入量的总和与所述的十二烷基硫酸钠缓冲液加入量相等。

优选的，本发明在步骤C中所述的RNA水解酶的浓度为30-50mg/L。

本发明带来的有益技术效果：

1、本发明采用CTAB提取和SDS提取结合的方式对天麻中的总DNA进行提取，解决了现有技术无法提取天麻中总DNA的问题，能够快速、高效的提取出天麻中的总DNA，且提取出来的总DNA纯度高、稳定性好。