[发明专利]一种产牛磺酸菌株的筛选方法及用该菌株发酵法生产牛磺酸

权利要求书

1.一种产牛磺酸枯草芽孢杆菌的筛选方法，其特征为：

1)枯草芽孢杆菌的初步分离纯化

称取约0.2g土壤于20ml 0.85％无菌生理盐水中，将菌悬液在沸水中振荡加热10min后，迅速冷却至室温，稀释菌悬液涂布于营养肉汤平板上，30℃倒置培养24h，挑取不同菌落形态的单菌落进行结晶紫染色，显微镜下观察芽孢，将有芽孢菌株作为进一步筛选的枯草芽孢杆菌疑似菌株，编号保存；

2)产牛磺酸枯草芽孢杆菌的筛选

将上述分离纯化得到的菌种接种于种子培养基中，然后转接到发酵培养基中，培养72h后离心收集发酵液，发酵液经过预处理后采用内标法经高效液相色谱进行定性分析，使得牛磺酸标准品峰高增高的菌株即为产牛磺酸的枯草芽孢杆菌。

2.根据权利要求1所述一种产牛磺酸枯草芽孢杆菌的筛选方法，其筛选得到产牛磺酸的枯草芽孢杆菌经形态学、生理生化及16sRNA分子生物学鉴定为枯草芽孢杆菌，并命名为Bacillus.subtilis FMME059。

3.一种牛磺酸的生产方法，其特征是采用B.subtilis FMME059为出发菌株，以种子培养和液体发酵生产牛磺酸；

1)种子培养基以g/L计：葡萄糖40，胰蛋白胨20，KH₂PO₄1.5，K₂HPO₄，0.5，MgSO₄7H₂O0.5，生物素50，酵母膏5，尿素3，盐酸硫胺素10，初始pH 7.2-7.4；

培养条件：温度30℃、摇床转速200rpm条件下，培养18-20h；

2)液体发酵培养：

发酵培养基以g/L计：葡萄糖20，酵母粉15，尿素15，KH₂PO₄1.5，K₂HPO₄1.5，MgSO₄·7H₂O0.4，MnCl₂4H₂O MgSO₄·7H₂O0.2，硫酸铵20，初始PH 7.2-7.4；

发酵条件：接种量10％，温度30℃、摇床转速200rpm条件下，发酵72h。