[发明专利]一种细胞共养的方法

权利要求书

1.一种细胞共养的方法，其特征是通过以下步骤实现的：

（1）共培养的准备，盖玻片、24孔板、不锈钢筛网；

（2）细胞单独培养，从组织中取细胞样品分离鉴定培养；

（3）细胞共同培养实验，取单独培养好的细胞计数后接种于24孔板中，加入血清培养液，培养24小时，细胞快呈融合生长状态时，更换小牛血清的DMEM，每孔加入庆大霉素24小时后进行共培养。

2.如权利要求1所述的细胞共养方法，其特征是：步骤（1）共培养的准备:盖玻片用玻璃刀裁成刚好能放入24孔板的正方形，按细胞培养用品要求清洗后消毒备用，不锈钢筛网用剪刀剪成正方形，再把筛网的钢丝弯成垂直于网面的支脚，大小以能放入24孔板孔为宜，使上下二层细胞相差1mm，清洗后消毒备用。

3.如权利要求1所述的细胞共养方法，其特征是：步骤（2）细胞单独培养:大鼠肾间质成纤维细胞和大鼠肾小管上皮细胞的培养与鉴定按文献报道进行，培养成功后进行下列实验，以观察上述装置培养细胞的可行性，实验前大鼠肾小管上皮细胞和大鼠肾间质成纤维细胞均作锥虫蓝(0.4%) 染色，检测细胞的活性状态。

4.如权利要求1所述的细胞共养方法，其特征是：步骤（3）细胞共同培养实验:将原代培养的大鼠肾小管上皮细胞消化后计数，按每孔1×10⁵个细胞接种于预先放有备用盖玻片的24孔板中，以含10%小牛血清的DMEM培养液培养24小时，细胞快呈融合生长状态时，更换培养液为含1%小牛血清的DMEM，每孔加入200μg/ml庆大霉素24小时后进行共培养，取第3代的大鼠肾间质成纤维细胞，按每孔1×10⁵细胞数植入24孔板内以含10%小牛血清的DMEM培养液培养12小时，细胞贴壁生长后，将培养液更换为含1%小牛血清的DMEM继续培养24小时，放入备用不锈钢筛网，再放入上述长有大鼠肾小管上皮细胞的盖玻片，共培养48小时后，去盖玻片及不锈钢筛网，用四甲基偶氮多胍(MTT) 掺入法测定大鼠肾间质成纤维细胞的增殖情况。