[发明专利]双峰驼pepsin A蛋白基因、重组蛋白及其克隆方法

说明书

技术领域

本发明涉及基因工程技术领域，是一种双峰驼pepsin A蛋白基因、重组蛋白及其克隆方法。

背景技术

胃蛋白酶（英文名称：Pepsin）是一种消化性蛋白酶，由胃部中的胃粘膜主细（gastricchiefcell）所分泌，功能是将食物中的蛋白质分解为小的肽片段。胃蛋白酶的前体被称为胃蛋白酶原。胃蛋白酶在不同的生物品种中有不同的胃蛋白酶成份，其分子量和氨基酸组成都不相同，存在一定差异，但也具有很大的相似性。

在脊椎动物中，胃蛋白酶属于天冬氨酸蛋白酶家族，该家族除胃蛋白酶外，还包括组织蛋白酶，肾素(血管紧张肤原酶)等，因此天冬氨酸蛋白酶家族是蛋白质超家族。Vincenzo Carginale等研究了胃蛋白酶基因家族的选择性进化和功能的多样性的关系，他们用来自30种不同脊椎动物的胃蛋白酶的基因编码序列来推断基因的种系发生，从种系发生树上能推断出基因的复制和缺失，从基因树和种系树上能看出相关的结合重组信息。来自同一基因家族的胃蛋白酶尽管具有结构上的相似性，但在功能和化学性质上有很大的不同，这提示了伴随基因复制的遗传过程出现了功能改变的正向选择过程.。胃蛋白酶基因家族在相关生物上所表现的明显的差异性可以较好地说明种系发生的问题，基因的丢失可能只是简单的意味着特定的基因片段不存在于序列之中，但在多数情况下是基因真正的缺失(功能的失活)，这两种可能性并不是很容易分清。在目前的序列研究中，在两栖动物的胎儿胃蛋白酶基因(胃蛋白酶A和F)是确定缺失，而在高等脊椎动物的缺失却很有可能是不完全取样造成。这个结论可用以下事实来印证，在胃蛋白酶种属中的凝乳酶(胃蛋白酶Y)有很好的牛奶一凝乳催化活性，这与其在幼年哺乳动物中发挥营养功能一致。在一些哺乳动物胃蛋白酶A从未被发现，在不同动物种属中胃蛋白酶的特异性与其不同的饮食适应性有关，同样在特定种属中的多种胃蛋白酶A的形式也与食物种类及饮食习惯有关，蝶鱼具有两种形式的胃蛋白酶A且生活在冷水中，可推测正是由于基因的增强作用促使该酶产量提高以增加其在低温下的消化功能。兔子虽是草食动物却具有三种同工型的胃蛋白酶A，这提示了草本食物由于其蛋白浓度低需要更多的酶来完成其消化降解作用。

从医学的角度看，胃蛋白酶原及胃蛋白酶在消化道中具有重要的生理功能，人的胃蛋白酶原含量及胃蛋白酶活性的大小与人的消化道疾病有直接的联系，据报道，血清中胃蛋白酶原含量的检测在胃癌的早期诊断上有重要的临床意义。在工业上，胃蛋白酶广泛地应用于方便食品.奶酪、消化药和口香糖加工制造。近年来，该酶在啤酒，果酒等澄清方面显示一定的应用潜力，传统的酶法干酪加工时所用凝乳酶为小牛皱胃酶，其数量有限、价格昂贵。动物性胃蛋白酶取自成年动物(如猪、牛等)的胃，因其来源广，成本较低，故国外该酶在干酪生产中已得到了一定程度的应用。 

胃蛋白酶作为一种重要的蛋白水解酶，其酶学性质，底物专一性，抑制作用等都与一般的蛋白酶不同，因此, 通过对pepsin A从基因、蛋白质、酶活性等多方面的研究, 必然会为医药及食品等领域带来新的启示。双峰驼有比较特殊的生理特性，尤其具有较强的植被适应能力，很适合进行消化性蛋白酶研究。本发明参考其它物种pepsin A基因序列，克隆测序获得双峰驼pepsin A基因的cDNA序列，并对不同物种pepsin A基因的CDS序列进行同源性比较，旨在了解和验证pepsin A基因的结构特点，为今后研究pepsin A基因与双峰驼消化系统的关系提供基础资料。

发明内容

本发明提供了一种双峰驼pepsin A蛋白基因、重组蛋白及其克隆方法，pepsin A蛋白即胃蛋白酶A（英文名称：Pepsin）是一种将食物中的蛋白质分解为小的肽片的消化性蛋白酶，克服了上述现有技术之不足，其能有效解决 的问题。

本发明的技术方案之一是通过以下措施来实现的：一种双峰驼pepsin A蛋白基因，该基因的核苷酸序列具有SEQ ID NO.1所示的序列。

下面是对上述发明技术方案的进一步优化或/和改进：

上述基因的核苷酸序列具有SEQ ID NO.1中32-1204位的序列。

本发明的技术方案之二是通过以下措施来实现的：一种双峰驼pepsin A蛋白基因的重组蛋白。

下面是对上述发明技术方案之二的进一步优化或/和改进：

上述重组蛋白的氨基酸序列具有SEQ ID NO.2所示的序列。

上述重组蛋白为具有SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列的多肽、或其保守性变异多肽、或其活性片段，或其活性衍生物。